Extrémités collantes

[Please]

Bonjour !

J'ai bcp de mal a comprendre a quel moment, dans quelles circonstances, les extrémités collantes générées par 2 enzymes différentes peuvent se réassocier, et dans quels cas elles ne le peuvent pas... (suivant tel ou tel type de coupure...) Si quelqu'un pouvait me l’expliquer ça serait super ! Merci beaucoup !!

Edited December 1, 2019 by Please

[Lubrachka]

Tu dois regarder si tes 2 enzymes sont compatibles entre elles. 

Pour faire ça, tu peux dessiner tes deux brins d'ADN en mettant des traits là où ça coupe. Attention, comme c'est double brin, l'enzyme coupe aussi au niveau de l'autre brin. Tu auras donc une séquence au milieu de tes deux coupures, ça va être cette séquence qui va permettre la réassociation. 

Si la séquence est la même pour les 2 enzymes alors elles se rassoient entre elles. Si elle est différente, elles ne peuvent pas se réassocier. 

Par exemple : 

Ici pour EcoR1, la séquence entre les deux coupures est AATT

 

Si tu as une autre enzyme : (j'invente elle n'existe pas) : Ic2 qui coupe NNN/AATTNNN  tu auras donc NNN   AATTNNN et NNNAATT NNN, tu vois que la séquence au milieu est aussi AATT comme Eco1 donc les deux enzymes peuvent se réassocier

[léléGT]

Coucou ! 

 

@Lubrachka a bien tout expliqué. Le mieux c'est de dessiner (comme toujours en genome). Si tu vois que les bouts sortant sont complementaires alors les fragment peuvent se réassocier.

 

Je me permet juste de rajouter un point : si tu utilises juste une enzyme qui digère un brin pour donner deux fragments ces derniers risquent de se recoller spontanément, donc pour éviter ça on utilise la Phosphatase Alcaline qui les empêche de se recoller entre eux.

Je te donne un exemple : ça peut-être utilisé quand tu travailles sur une mutation abolissant un site de coupure par exemple. Si tu digères tes brins d'ADN mais que tu ne mets pas de phosphatase alcaline alors le résultat sera positif pour la mutation alors que l'enzyme aura potentiellement agit.

 

N'hésites pas si tu as besoin de plus d'explications !

[Please]

  On 12/1/2019 at 12:38 PM, léléGT said:

Coucou ! 

 

@Lubrachka a bien tout expliqué. Le mieux c'est de dessiner (comme toujours en genome). Si tu vois que les bouts sortant sont complementaires alors les fragment peuvent se réassocier.

 

Je me permet juste de rajouter un point : si tu utilises juste une enzyme qui digère un brin pour donner deux fragments ces derniers risquent de se recoller spontanément, donc pour éviter ça on utilise la Phosphatase Alcaline qui les empêche de se recoller entre eux.

Je te donne un exemple : ça peut-être utilisé quand tu travailles sur une mutation abolissant un site de coupure par exemple. Si tu digères tes brins d'ADN mais que tu ne mets pas de phosphatase alcaline alors le résultat sera positif pour la mutation alors que l'enzyme aura potentiellement agit.

 

N'hésites pas si tu as besoin de plus d'explications !

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C'est super merci beaucoup a vous deux !!