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Pré-hybridation Southern blot


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Posted (edited)

Bonjour,

En cours nous avons parlé de pré hybridation avant de faire l'hybridation sur la membrane en southern blot. Mais je ne comprends pas bien quel est l'intérêt car je sais que c'est pour saturer les espaces vides de la membrane ( donc les espaces non remplis par l'ADN je suppose) avec l'ADN d'une autre espèce. La sonde s'hybride sur la membrane sinon mais pourquoi ? Car elle est chargée ? 

Et enfin pourquoi la sonde ne s'hybridera pas sur l'ADN de l'autre espèce qui est venu saturer la membrane ?

Merci d'avance à celui où celle qui pourra me répondre.

Edited by Théo81
  • Solution
Posted

Coucou !

 

Dans le cours le professeur n'aborde pas les raisons exactes, la sonde peut s'hybrider à la membrane par erreur, cest une bonne question mais il ne sera pas attendu de toi de connaitre ces mécanismes. Il se peut que la sonde soit retenue par la membrane puisque cest une séquence nucleotidique, et fixée par différents types d'interactions (non abordées dans le cours).

 

Ensuite je pense qu'il faut considérer que les séquences d'ADN utilisées ne sont pas complémentaires des sondes utilisées (ou de la sonde selon la manipulation).

Donc on considère que si le résultat est positif c'est que la sonde s'est hybridée à la séquence d'intérêt.

 

J'espère avoir pu t'éclairer un peu ! 

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