Ancien du Bureau Please Posted November 25, 2019 Ancien du Bureau Posted November 25, 2019 Bonsoiir ! Aujourd'hui en amphi, je n'ai pas bien compris le principe de fabrication des ribosondes, est-ce que quelqu'un pourrait me le réexpliquer svp ? Merci d'avance !! Quote
Solution AHMED24 Posted November 25, 2019 Solution Posted November 25, 2019 Salut ! Grâce à un vecteur comme représenté ci-dessus, on isole un fragment d'ADN bicaténaire à l'aide d'enzymes de restrictions appelées aussi endonucléases. Puis on transcrit notre ADN grâce à une ARN transcriptase (ici SP6 RNA Polymérase car on utilise le promoteur SP6) avec dans le milieu des nucléotides marqués. On dégrade ensuite l'ADN par une DNase ( une nucléase, ici la DNase I). On fait une gel filtration : séparation en fonction de la taille. Ensuite on fait une extraction dans un gradient phénol chloroforme et on obtient nos ribosondes. Quote
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