RT-PCR/ÉLECTROPHORÈSE

[Guest Bulbinette]

Bonjour!

 

J'aurai besoin d'une petite explication au sujet de l'analyse d'une électrophorèse suite à la méthode de RT-PCR... À partir des résultats, comment peut-on dire si un individu est homozygote ou hétérozygote pour la mutation étudiée? Merci beaucoup à la personne qui va m'éclairer! 

 

Bonne journée!

[Josibed]

Helloooo!

Alors tout d’abord en RT PCR tu étudies les ARNm donc seulement les exons de ton gène.

De plus en RT PCR comme en PCR tu peux observer les ALLÈLES ce qui veut dire que tu peux détecter une mutation dans plusieurs cas :

- s’il y a une rétention d’intron tu auras une bande de poids moléculaire « normal » et une bande plus lourde donc plus haute dans l’électrophorèse.

- Idem à l’inverse pour l’excision d’un exon

- Enfin là c’est la partie un peu plus complexe si ta mutation change ta séquence de nucléotides. Pour cela il faut connaître ta séquence de base et la séquence modifiée suite à la mutation. Par exemple allèle normale : ACUG et allèle mutée : ACCG. Dans ce cas là tu utilise une enzyme de restriction reconnaissant la séquence mutée (ici « ACCG ») et si l’individu et hétérozygote tu obtiens :

• avant la digestion : une bande d’un poids moléculaire X
• après la digestion : une bande d’un poids moléculaire X correspondant à l’allèle normale, et deux bandes de plus faibles poids moléculaires Y et Z correspondant à l’allèle mutée digérée par l’enzyme

Tu remarqueras que l’enzyme de restriction peut aussi reconnaître la séquence normale ACUG (—> ACTG suite à la rétro transcription car n’oublie pas que les enzymes ne coupent que sur de l’ADN double brin) et dans ce cas la tu auras les résultats inverses donc deux bandes Y et Z pour l’allèle normale et une bande X pour l’allèle mutée. 

J’espère que ma réponse est assez claire 

En espérant que les QCM de titi Levade n’aient plus aucun secret pour toi 

 

[Guest Bulbinette]

Merci merci merci mille fois pour cette explication très claire! Bonne journée