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Déterminer l'AA N-ter + questions sur les Ig


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Posted (edited)

Salut !

- Je n'ai pas bien compris les réactions mettant en jeu le dinitrodifluorobenzène (notamment l'hydrolyse acide) et le PITC.

Qqun veut-il bien me l'expliquer svp ?

 

- Ce sont bien les chaînes lourdes qui caractérisent le type d'Ig (A, D, E...) ?

- Quel est le nom de la protéase qui coupe les Ig juste après les chaînes légères ?

- Les ponts disulfures inter et intra-chaînes permettent de relier 2 domaines d'AA de 110 AA constitués de 7 feuillets beta ?

 

Merci !

Edited by OxyGenS
  • Ancien Responsable Matière
  • Solution
Posted

Salut !

-Pour le di-nitro-fluoro-benzène : C'est un composé utilisé pour déterminé l'AA en N-terminal d'un peptide. Il se fixe sur le peptide en libérant une molécule de H-F (le F provenant du DNFB et le H du premier AA). L'hydrolyse acide qui suit permet de détacher les autres AA du peptides afin qu'il ne reste plus accroché au DNFB que celui en position N-term. L'hydrolyse détruit les liaisons peptidiques sauf celle unissant le DNFB à l'AA N-term. 

-Pour le PITC : Le PITC réagit également avec l'AA N-terminal et forme un dérivé cyclique de phénylthiocarbamide. En conditions acides, ce dérivé sera clivé en dérivé de thiazolinone, qui sera ensuite extrait dans un solvant organique et traité avec de l'acide pour former le PTH (comme sur l'image). Ce PTH correspond au dérivé phényl-thiohydantoïne de l'AA N-term présent dans la diapo de cours. C'est ce dérivé qui sera ensuite identifié pour déterminé l'AA N-term. 

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-Oui, ce sont les domaines constants des chaines lourdes qui permettent de caractériser les Ig.

-Il n'y a pas réellement de protéase spécifique, mais on peut utiliser la papaïne par exemple.

- C'est seulement les ponts disulfures INTRA-chaînes, comme tu peux le voir sur l'image ci-dessous. Les ponts disulfures inter-chaînes permettent de relier d'une par le fragment Fc et les fragments Fab (donc chaînes lourdes et légères) et d'autre part les chaînes légères 2 à 2. 

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Voilà, j'espère que ça a pu t'aider 🙂 

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