QCM entrainement 40) partie II

[Enzamenclinique]

Bonjour, 

Qqn peut m'expliquer comment faire ce QCM (40) avec une correction détaillée ?  J'ai un problème en particulier pour repérer les sens 5'3', merci par avance, bon après-midi ! 

 

 

[mathltr]

Salut  

Ce qui est important dans ce QCM c'est qu'on te demande une probabilité théorique d'expression de toute la séquence de la protéine recombinante de 100%. 

Pour ça il faut faire attention à ce que les endonucléases créent des extrémités compatibles entre elles pour que l'ADN puissent s'insérer dans le plasmide, et il faut surtout faire attention à ce que ton ADN soit inséré dans le bon sens, c'est à dire que le codon ATG doit suivre le promoteur pour que la traduction puisse se faire! L'extrémité avec le codon ATG doit être située avant celle ou il y a le codon stop si tu veux (c'est compliqué à expliquer comme ça sans schéma ou quoi, dis moi si c'est pas clair !!) 

 

item A : FAUX

ici tu sais que ton ADNc il a des sites pour EcoR I des 2 côtés, donc si tu ouvres ton plasmide avec EcoR I ton ADN peut s'insérer soit dans le bon sens (avec ATG d'abord), soit dans le sens inverse (avec le codon stop d'abord!). Donc ici ta probabilité d'expression de la protéine recombinante n'est que de 50%

 

item B : FAUX

ici si tu digères l'ADNc par Spe I et Sac I, tu le coupe après ATG et avant le codon STOP donc tu n'auras pas l'expression de toute la séquence de la protéine recombinante (tu n'auras d'ailleurs pas d'expression du tout puisque tu enlèves l'ATG)

 

item C : FAUX 

Toujours la même chose, si tu digères l'ADNc par Spe I tu le coupes en plein dans la séquence codante 

 

item D : FAUX 

couper l'ADNc avec Sac I -> couper la séquence codante 

 

item E : VRAI

pour celui la, il faut regarder si Spe I et Xba I constituent des extrémités compatibles entre elles (ce qui est le cas)

dans cet item, l'ADNc est bien coupé avant ATG, et les extrémités ne sont pas toutes compatibles entre elles (EcoR I n'est ni compatible avec Spe I ni avec Xba I), donc l'ADN s’insérera forcément dans 1 seul sens : Spe I -> Xba I et EcoR I -> EcoR I

tu vois bien que sur le SCM le site de Spe I est placé avant celui de EcoR I, et le site Xba I de l'ADNc se situe bien avant l'ATG

ton ADN sera donc bien inséré dans le bon sens et avec une probabilité de 100%, et permettant d'exprimer toute la séquence de la protéine recombinante  

 

Voila j'espère avoir été claire, hésite pas si quelque chose est encore flou !