Technique

[Jadox]

Bonjour,  j'aimerais une clarification sur un item du poly 2019-2020

" Pour colorer des cellules fixées, il faut tout d'abord les perméabiliser ", compté vrai, mais comme lorsque l'on fixe des cellules elles meurent, rendant perméable leur MP, 

n'est-il pas inutile de les perméabiliser ?

 

Merci d'avance 

[happybee]

Hey @Jadox !

Alors selon moi comme la cellule est "fixée/figée" ok elle est morte mais seulement parce elle n'a pas d'activité, figée dans le temps en pleine action la pauvrette ^^ du coup la membrane (figée aussi) va rien laisser passer si tu l'as pas perméabilisée (c'est vraiment ma théorie, j'espère que je dis pas de connerie), 

j'ai compris que "figé" = rien ne bouge, ni ne rentre, ni ne sort (au sens large du terme hein pcq certains petits trucs peuvent changer comme par exemple la dénaturation de quelques protéines quand tu chauffe pour garder la paraffine liquide)

je sais pas trop si je réponds à ta question  

[Epsilon]

il y a 15 minutes, Jadox a dit :

Bonjour,  j'aimerais une clarification sur un item du poly 2019-2020

" Pour colorer des cellules fixées, il faut tout d'abord les perméabiliser ", compté vrai, mais comme lorsque l'on fixe des cellules elles meurent, rendant perméable leur MP, 

n'est-il pas inutile de les perméabiliser ?

 

Merci d'avance 

 

il y a 8 minutes, happybee a dit :

Hey @Jadox !

Alors selon moi comme la cellule est "fixée/figée" ok elle est morte mais seulement parce elle n'a pas d'activité, figée dans le temps en pleine action la pauvrette ^^ du coup la membrane (figée aussi) va rien laisser passer si tu l'as pas perméabilisée (c'est vraiment ma théorie, j'espère que je dis pas de connerie), 

j'ai compris que "figé" = rien ne bouge, ni ne rentre, ni ne sort (au sens large du terme hein pcq certains petits trucs peuvent changer comme par exemple la dénaturation de quelques protéines quand tu chauffe pour garder la paraffine liquide)

je sais pas trop si je réponds à ta question  

Comme le dit @happybee , la fixation des cellules permet le maintien des organites et molécules de la cellule tout en permeabilisant sa MP (tout dépend de type de cellule, de la nature de la molécule (ou organite) et du type de microscopie utilisé). La coloration permet de les visualiser, et la pénétration de ce dernier se fait donc grace a la permeabilisation.

  Dans cette situation la cellule est bien morte, mais le but ici est de s'interesser au nombre , état, localisation et répartition d'une structure donnée (role des colorants) . 

 

 

  Ensuite pour visualiser une cellule in vivo , on se base sur la microscopie à contraste de phase (entre autres...).

[ISB]

Salut, je viens apporter une réponse un peu plus nuancée puisque oui une cellule fixée est une cellule morte où la perméabilité membranaire va augmenter du fait de la perte de fonction des différents éléments cellulaires qui jouaient un rôle dans le maintient de la perméabilité membranaire de la cellule vivante.  

 

Mais, souvent, on va quand même utiliser notamment des détergents pour augmenter encore plus la perméabilité membranaire, même si la cellule est fixée, afin de permettre l'entrée, par exemple, d'anticorps qui sont de grosses molécules incapable d'entrer dans des cellules vivantes et qui nécessite donc qu'on perméabilise la membrane. Ces anticorps sont souvent utilisés pour la coloration.

[happybee]

il y a 42 minutes, ISB a dit :

Salut, je viens apporter une réponse un peu plus nuancée puisque oui une cellule fixée est une cellule morte où la perméabilité membranaire va augmenter du fait de la perte de fonction des différents éléments cellulaires qui jouaient un rôle dans le maintient de la perméabilité membranaire de la cellule vivante.  

 

Mais, souvent, on va quand même utiliser notamment des détergents pour augmenter encore plus la perméabilité membranaire, même si la cellule est fixée, afin de permettre l'entrée, par exemple, d'anticorps qui sont de grosses molécules incapable d'entrer dans des cellules vivantes et qui nécessite donc qu'on perméabilise la membrane. Ces anticorps sont souvent utilisés pour la coloration.

Donc la fixation entraine une mort cellulaire , augmentant la perméabilité de la membrane mais pas suffisamment pour laisser passer la coloration (cf. ce que t'as dit concernant les Ac qui, en entrant par les pores créées par la perméabilisation apportent la coloration) en gros c'est ça ? 

[ISB]

il y a 7 minutes, happybee a dit :

Donc la fixation entraine une mort cellulaire , augmentant la perméabilité de la membrane mais pas suffisamment pour laisser passer la coloration (cf. ce que t'as dit concernant les Ac qui, en entrant par les pores créées par la perméabilisation apportent la coloration) en gros c'est ça ? 

C'est ce que j'ai compris pour ma part et avant de vous répondre j'ai été voir à quoi plusieurs protocoles de fixation cellulaire et à chaque fois ils évoquent une étape de perméabilisation après la fixation

[happybee]

@ISB d'accord mercii beaucoup!! 

Révélation

il y a 7 minutes, ISB a dit :

avant de vous répondre j'ai été voir à quoi plusieurs protocoles de fixation cellulaire

waaa ça gère le poste du tuteur par ici 

 

[Jadox]

Il y a 3 heures, ISB a dit :

Salut, je viens apporter une réponse un peu plus nuancée puisque oui une cellule fixée est une cellule morte où la perméabilité membranaire va augmenter du fait de la perte de fonction des différents éléments cellulaires qui jouaient un rôle dans le maintient de la perméabilité membranaire de la cellule vivante.  

 

Mais, souvent, on va quand même utiliser notamment des détergents pour augmenter encore plus la perméabilité membranaire, même si la cellule est fixée, afin de permettre l'entrée, par exemple, d'anticorps qui sont de grosses molécules incapable d'entrer dans des cellules vivantes et qui nécessite donc qu'on perméabilise la membrane. Ces anticorps sont souvent utilisés pour la coloration.

@ISB Merci beaucoup pour ta réponse, j'ai saisi la nuance, logique, de ton explication