petites questions

[maestro]

Bonsoir!

immuno-transfert----> dénaturant

immuno-précipitation---> non dénaturant

 immune-précipitaition suivit d'un immunotransfert ça donne quoi?

 

et aussi est-ce qu'on peut dire que la méthode analytique quantitative c'est semi quantitatif? 

merci d'avance<3

 

[Soleneuh]

Hello !

il y a 13 minutes, maestro a dit :

 immune-précipitaition suivit d'un immunotransfert ça donne quoi?

bah dénaturant à cause de l'immuno-transfert ^^

 

et l'autre question je sais pas  

[maestro]

@Soleneuh

https://www.noelshack.com/2019-17-1-1555956583-capture-d-ecran-2019-04-22-a-20-09-18.png

du coup, qu'est-ce qui change entre les deux manipulations? je me dis que comme d'habitude il y a un technique qui dénature et un autre qui ne dénature pas,

cela nous permet alors de différencier les épitoges séquentiels des formationnels ( en me disant que l'IT dénature et que IP+IT ne dénature pas je réponds juste au QCM d'où ma question) 

[matt]

je m'incruste (sorry @maestro)  pour poser une question dans le même thème (histoire de pas ouvrir un post en plus)

 

Donc voilà c'est un extrait d'un exo sur la plateforme qcm, et donc une des questions demande si ça parle d'un épitope confo ou séquentiel et la justification c'est qu'on ne sait pas puisque c'est en conditions non-dénaturantes. Bon je vois bien qu'il y a écrit "en condition non dénaturante" mais ce que je ne comprends pas c'est que ça soit non dénaturant alors qu'on fait une électrophorèse en PAGES-SDS (dénaturant, isn't it ?). Voilà voilà je ne comprends pas très bien, donc @Soleneuh j'ai besoin de ton aide stp ^^

 

Révélation

 

Edited April 22, 2019 by matt

[maestro]

Bonsoir @matt,

je me permets de te répondre mais je ne suis sur de rien je ne cite que la page25 du poly de nogueira, du coup on attend quand mm confirmation d'un rm pour ta réponse qui m'intéresse aussi!

Alors "lors d'une IP, on travaille à partir d'un extrait protéique sans SDS et sans beta-mercaptoéthanol. Cette technique permet la reconnaissance de protéines solubles non dénaturées et donc la reconnaissance des épitoges confomrationnels." " L'immunoprécipité et l'extrait protéique de départ sont séparés par electrophorèse en gel de polyacryamide-SDS, par IEF ou par electrophorèse bi-dimensionnelle, autoradiographies puis analysés comparativement"

Je pense que c'est de là que vienne l'ambiguïté de nos deux items, on est bien en. condition non dénaturant puisque les anticorps de sont fixés aux protéines d'intérêts avant la mise en présence d'agent dénaturant, mais après on fait migrer tout ça en utilisant des techniques dénaturantes ( mais qui n'ont alors plus d'effet sur notre expérience), que ca soit dans ton exemple avec du SDS ou ds mon exemple en faisant l'IT après l'IP,

 

je dis surement n'importe quoi mais c'est ma piste de réflexion mdrrrrrrr 

 

pardonnez moi pr les fautes d'orthographes et l'auto-correcteur qui me fait des phrases sans queu ni tête

[Reïner]

il y a 25 minutes, maestro a dit :

Je pense que c'est de là que vienne l'ambiguïté de nos deux items, on est bien en. condition non dénaturant puisque les anticorps de sont fixés aux protéines d'intérêts avant la mise en présence d'agent dénaturant, mais après on fait migrer tout ça en utilisant des techniques dénaturantes ( mais qui n'ont alors plus d'effet sur notre expérience), que ca soit dans ton exemple avec du SDS ou ds mon exemple en faisant l'IT après l'IP,

 

je dis surement n'importe quoi mais c'est ma piste de réflexion mdrrrrrrr 

Ben t'as raison

[Soleneuh]

il y a une heure, maestro a dit :

du coup, qu'est-ce qui change entre les deux manipulations?

alors pour la différence entre immunotransfert, immonoprécipitation ou les 2, il y a une super réponse d' @aymericz sur ce post  (qui rappelle bien comment fonctionnent les 2 techniques) :

 

 

et du coup j'en avais déduis  que :

 

*en immunoprécipitation on a un mélange de protéines, et nous on cherche à en récupérer une en particulier, donc on va utiliser un Ac anti- protéine d'intéret avec accroché dessus un truc lourd pour pouvoir récupérer l'ensemble anticorps-protéine d'intéret avec une centrifugation, et à la fin on a isolé notre protéine. Cette technique est donc non dénaturante

(*en co-immunoprécipitaion c'est la même chose mais en isolant plusieurs protéines (liées à la protéine d'intéret de départ), du coup on isole plusieurs protéines d'un coup.)

 

*en immunotransfert = Western blot, on va faire une séparation du résultat de notre co-immunoprécipitation pour séparer toutes nos protéines selon leur taille, et ça se fait avec du SDS donc en conditions dénaturantes (comme on avait vu au S1 en biomol ou en génome)

 

 

il y a une heure, matt a dit :

Donc voilà c'est un extrait d'un exo sur la plateforme qcm, et donc une des questions demande si ça parle d'un épitope confo ou séquentiel et la justification c'est qu'on ne sait pas puisque c'est en conditions non-dénaturantes. Bon je vois bien qu'il y a écrit "en condition non dénaturante" mais ce que je ne comprends pas c'est que ça soit non dénaturant alors qu'on fait une électrophorèse en PAGES-SDS (dénaturant, isn't it ?). Voilà voilà je ne comprends pas très bien, donc @Soleneuh j'ai besoin de ton aide stp ^^

 

--> donc oui normalement en conditions dénaturantes on perd les épitopes conformationnels (visible qu'en conditions non dénaturantes)

--> ensuite oui je pense que @maestro et @Reiner ont raison, ce qui est dit dans l'énoncé comme étant dans des conditions non dénaturantes, c'est l'immuno-précipitation (donc là c'était sans SDS), donc l'anticorps s'est fixé soit sur un épitope séquentiel, soit conformationnel, mais on ne peut pas savoir puisqu'à ce moment là c'était en conditions non dénaturantes.

Ensuite oui pour visualiser on a utilisé du SDS page pour faire un immuno-transfert (Western Blot)

Je pense que la phrase de Maestro résume bien :

il y a 45 minutes, maestro a dit :

on est bien en. condition non dénaturant puisque les anticorps de sont fixés aux protéines d'intérêts avant la mise en présence d'agent dénaturant, mais après on fait migrer tout ça en utilisant des techniques dénaturantes

 

je pense que c'est ça ^^

 

je ne sais pas si en gros ça répond à ta question initiale maestro ?

Edited April 22, 2019 by Soleneuh

[maestro]

il y a 22 minutes, Reiner a dit :

Ben t'as raison

Ahhhhh je suis pas con

il y a 9 minutes, Soleneuh a dit :

je ne sais pas si en gros ça répond à ta question initiale maestro ?

yep c’est clair dans ma tete maintenant merci @matt et @Soleneuh 

[matt]

Merci merci @maestro @Reiner et @Soleneuh c'est nickel pour moi !! 

[Soleneuh]

Avec plaisir @maestro et @matt ça m'a permis de comprendre aussi grâce à vos questions, alors merci à vous aussi  

Edited April 22, 2019 by Soleneuh