CCB 2015

[Meredith]

Salut , 

j'ai un petit souci avec la correction de ce qcm qui compte la D fausse je ne comprend pa pourquoi qqn pourrait m'aider svp?  

[Bilskur]

Salut  

 

En fait c'est que les bouts coupés par NcoI et PaeI sont incompatibles, il auront la même extrémité, mais sur le même brin, du coup ça pourra pas se coller  

 

Regarde : Tu vas digéré ton cDNA avec HindIII et NcoI donc : 

 

5' A\AGCTT........................................................................C\CATGG  3'

3' TTCGA/A........................................................................GGTAC/C  5'

Donc là tu as ton cDNA avec l'extrémité digérée par HindIII en vert, et celle digérée par NcoI en rouge. 

 

Si maintenant tu regardes ton plasmide qui est ouvert, il est ouvert pour laisser rentrer le cDNA, donc on va garder les parties extérieures quand tu digères, et pas l'intérieur comme on le fait avec l'insert. 

 

On a donc : 

5' A\AGCTT ..................................................................................... CCATG/G  3'

3' TTCGA/A ..................................................................................... G\GTACC 5'

 

Maintenant si tu regardes, tu vois qu'il y a deux problèmes au niveau de l'extrémité rouge : 

1° Pour le cDNA, les deux extrémités sont sur deux brins différents, alors que pour le plasmide, les deux sont sur le même brin, donc c'est pas possible que le cDNA s'insère correctement des deux côtés.

2° Si tu regardes les extrémités rouges libres pour le cDNA et le plasmide,  tu vois que les deux ont un GTAC, ce qui veut dire que pour s'insérer correctement, il faudrait avoir une liaison G-G, T-T, A-A, et C-C, et comme tu le sais, c'est impossible  

 

Du coup, tout ça fait dire que cet item est bien faux  

 

C'est assez clair?

[Meredith]

Super merci pour ta réponse très détaillée j'ai compris

[Itinéris]

Heyhey ! Je relance ce sujet, est-ce que ducoup on peut dire que pour que ça marche il aurait fallu que HindlI et NcolI soient inversés sur le cDNA par exemple ? (genre HindI en Cterm et NcoII en Nterm) ? 

Ou ça se généralise pas ?  

Merci beaucouuup

[Bilskur]

Salut!  

En fait le truc c'est que NcoI et PaeI sont incompatibles.. 

Donc à partir de là tu peux préparer ton cDNA comme tu veux avec HindIII et NcoI, ça changera pas le fait qu'il pourra pas s'intégrer dans un plasmide ouvert par HindIII et PaeI