Annale Rangueil 2014

[Jou222]

Bonjour, 

encore deux petites question en Recherche :

https://www.noelshack.com/2019-11-4-1552562247-capture-d-ecran-2019-03-14-a-12-16-17.png

https://www.noelshack.com/2019-11-4-1552562248-capture-d-ecran-2019-03-14-a-12-16-53.png

 

item 4A: vrai, mais comment être sûr que la protéine fasse 400 kDa ? 

5C: je ne comprends pas pourquoi c'est faux..

 

Merci

[Bilskur]

Salut

 

Pour la 4A : 

Tu vois au dot-blot que l'AS et les deux anticorps reconnaissent quelque chose en dot-blot, qui en conditions non-dénaturantes, sinon tu n'aurais pas de signal. 

Or, quand tu étudies l'immunotransfert, tu vois qu'il n'y a qu'une seule protéine reconnue par l'AS, ce qui sous entend probablement qu'il n'y a que cette protéine dans ce protéome  

Du coup, comme l'Ac2 ne reconnait rien sur ton immunotransfert, mais qu'il y avait une réponse en dot-blot, ça veut dire qu'il fait une réponse avec un épitope conformationnel, et comme il n'y a que la protéine à 400 kDa, on arrive à la conclusion que c'est vrai  

 

5C : Quand tu développes un AS, c'est que tu vas avoir la production d'Ac dirigés contre toutes les protéines du sérum (chaque Ac est probablement monoclonal, mais il y a juste plein d'Ac produits). Du coup, dans ton sérum, tu vas reconnaître les protéines cancéreuses oui, mais aussi les protéines normales. 

Et avec cette technique, tu ne peux pas faire la différence entre les deux, donc tu ne pourras pas faire le diagnostic comme ça  

 

C'est assez clair?  

[Jou222]

Coucou @Bilskur et merci pour ta réponse!

Par contre je pense qu'il y a encore quelques petits trucs qui m'échappent..

 

En gros, pour la 4A, vu qu'on voit que AS, AC1 et AC2 en dot blot reconnaissent la même chose et que par ailleurs AS et AC1 reconnaissent une protéine à 400kDa, on peut en conclure que ce qui sera reconnu en immunotransfert par AC2 sera aussi la même protéine à 400kDa c'est bien ça?

 

Ah mince je suis désolée, je me suis trompée c'était la 5B qui me posait pb... 

 

 

[Bilskur]

Alors  

(Désolé pour le retard  )

 

En dot-blot, tu ne vois pas ce qui est reconnu, tu vois juste s'il y a quelque chose ou pas qui est reconnu, mais tu ne peux pas savoir si tes anticorps reconnaissent la même protéine ou pas. Tu peux juste voir que les trois reconnaissent quelque chose avec la même intensité ici  

Par contre, ce qui permet d'affirmer que c'est la même protéine, c'est que l'AS ne reconnait qu'une seule protéine. Or, un antisérum, c'est des Ac dirigés contre l'ensemble des protéines du sérum. Donc s'il n'y a qu'une seule bande c'est qu'il n'y a qu'un seule protéine reconnue  

Du coup, comme il y a qu'une seule protéine reconnue, et que l'Ac 2 donne un signal en dot-blot, c'est qu'il reconnait cette protéine là. Et comme il ne donne pas de bande en immunotransfert, c'est qu'il reconnait un épitope conformationnel  

 

Pour la 5B, c'est pour moi que dans ton sérum, tu vas avoir les protéines du sécrétome et celles de l'extrait total. Or, dans ton extrait total, l'AC1 reconnaitra la forme à 575 kDa et la forme à 400 kDa, et l'Ac2, on ne peut pas déterminer exactement ce qu'il va reconnaitre avec l'expérience, vu qu'il reconnait un épitope conformationnel d'on ne sait quelle protéine, même si on peut supposer que c'est celle à 575 kDa. 

De ce fait, tu ne peux pas être sur qu'il n'y aura que la forme à 400kDa qui sera reconnue en même temps par les deux anticorps, tu peux aussi avoir la forme à 575 kDa, ce qui biaiserai ta mesure  

 

C'est assez clair?