items de colle (bis)

[Jujunum]

Salut !! 

 

Encore des questions en recherche ( désolé pour ceux qui m'ont déjà répondu hier )

 

QCM 21 : On souhaite purifier une protéine P recombinante qui possède une étiquette (His)6. Sur le vecteur d’expression, on ajoute un site de clivage reconnu par la thrombine entre la séquence de la protéine P et la séquence de l’étiquette (His)6. Après production de la protéine P par des bactéries, on extrait les protéines totales des cellules et on purifie la protéine P grâce à une chromatographie d’affinité sur une colonne de Nickel. La protéine P a une masse moléculaire de 100 kDa et l’étiquette (His)6 a une masse moléculaire de 30 kDa :

E. La protéine P sans son étiquette (His)6 peut être obtenue en appliquant directement la thrombine sur la colonne.

Révélation

VRAI

J'avais compris qu'on pouvait couper directement sur la colonne sans passer par une phase d'élution avant mais il ne faut quand même pas la présence d'une étiquette ? 

 

QCM 24 : Parmi les stratégies de purifications suivantes à partir d’un lysat bactérien, lesquelles sont applicables à une protéine recombinante étiquetée par une chaîne Histidine (dont on connait seulement le pI et la polarité de la protéine) :

B. Une IsoElectroFocalisation qui va séparer les différentes molécules en fonction de leur pHi.

Révélation

FAUX

 Correction du TAT : Méthode d’analyse qualitative de la fraction préalablement purifiée.

 

Alors je ne comprends pas du tout la correction 

 

Merci à ceux qui prendront le temps de me répondre 

 

 

Edited March 13, 2019 by juju31

[Man-ondansétron]

salut!

Alors pour la 21E 

c'est bien ta protéine étiquetée que tu mets sur la colonne (elle va s'accrocher grâce à son etiquette histidine) mais ensuite tu appliques la thrombine directement sur la colonne qui va couper les étiquettes (trait rouge sur le schéma) tu vas donc récupérer ta protéine purifiée sans étiquette, cette dernière sera restée accrochée sur la colonne.

Pour la 24 c'est pas très clair pour moi non plus, mais il me semble que les isoelectrofocalisations, tout comme les électrophorèses SDS Page sont des techniques de verification (verifier la qualité de l'échantillon, la pureté...) et non de purification des protéines: tu ne peux pas récupérer ta protéine d'intérêt après. mais quelqu'un te donnera surement une réponse plus claire que la mienne la dessus.

[PierrickSenior]

Coucou, pour la question 2, dans l'énoncé on te parle des techniques servant à purifier une protéine. La correction du TAT dit que l'IEF n'est pas utilisée pour la purification de protéines mais bien comme méthode d'analyse qualitative, c'est à dire que cette expérience va servir à analysé la pureté de ta fraction déjà purifier (donc si tu as bien seulement ou presque le/les composants qui t'intéresse). 

Mme.Lajoie (), fait bien la distinction dans son cours, notamment la SDS-PAGE et l'IEF sont à différencié des méthodes de purifications. 

Edited March 13, 2019 by PierrickJunior

[Jujunum]

Merci @Man-ondansétron , je crois que j'avais mal compris l'item en faite mais maintenant c'est bcp plus clair !!! 

 

Et merci beaucoup @PierrickJunior pour ton explication P-A-R-F-A-I-T-E pour ma 2ème question ! 

 

Bonne journée à vous deux !