Mélie Posted April 30, 2014 Posted April 30, 2014 Bonjour ! Je n'ai pas du tout compris comment on procédait pour doser les cytokines à l'aide d'un cytomètre en flux et je me suis embrouillée dans ma prise de notes alors est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer (si ce n'est pas trop demander) ? Merci d'avance !
QuentinD Posted May 3, 2014 Posted May 3, 2014 En gros, tu veux doser 10 cytokines (A,B,C...) en meme temps, ce qui n'est pas possible en ELISA. Tu ne peux pas non plus utiliser 10 fluorochromes, c'est techniquement impossible. Qu'est-ce que tu fais ? Tu mélanges ton extrait de serum avec des billes (1,2,3... spécifiques de A,B,C...) contenant le meme fluorochrome FL3 mais en concentrations bien différentes, ce qui fait que tu peux les classer en différentes populations. Ce premier aspect est qualitatif, il te sert à savoir si la cytokine que tu cherches est bien présente (sur les schémas du cours tu vois qu'une bille possède plusieurs Ac donc elle lie plusieurs cytok dont elle est spé). Ensuite, on ajoute des Acs de détection marqués avec avec un autre type de fluorochrome FL2. Ceux-ci lient également les cytokines dont ils sont spé. Ce deuxième aspect est quantitatif (car 1 Ac lie 1 cytok). En croisant les deux données (diagramme du cours) tu vois qu'on obtient les concentrations des différentes cytokines analysées. J'espère être clair, je sais que cette partie du cours est assez difficile. Bon courage !
Mélie Posted May 15, 2014 Author Posted May 15, 2014 Alors tout d'abord un grand merci d'essayer de me répondre ! Effectivement, je ne suis pas sûre d'avoir tout bien saisi ^^ Si j'ai bien compris, on dispose de billes qui lient des anticorps spécifiques d'une cytokine donnée, en sachant que chaque bille renferme une concentration propre de fluorochrome ? Du coup on peut identifier chacune de ces populations de billes spécifiques d'une cytokine donnée ? (désolée si je répète presque ce que tu dis mais je veux être certaine d'avoir bien compris) Pour l'analyse qualitative, sur quoi se base t'on précisément ? En fait, je ne comprends pas comment on peut simplement considérer la fluorescence pour discriminer les billes et detecter la présence des cytokines alors que rien n'indique que les cytokines en question se sont bien fixées sur les anticorps ? Je ne sais pas si je suis trés claire Et comment procède t'on exactement ? (j'avoue que j'ai un peu de mal avec cette technique) On ajoute les billes fluorescentes dans le sérum, elles fixent les éventuelles cytokines puis elles sont analysées par le cytomètre de flux qui séparera les billes en fonction de la fluorescence ? Je suis désolée pour toutes mes questions un peu simplistes, mais je crois que je n'ai jamais vraiment compris comment fonctionnait le cytomètre de flux. Voilà, encore merci de ton aide !
Mélie Posted May 15, 2014 Author Posted May 15, 2014 Oups, pardon ! L'objectif n'est pas de séparer les billes mais de doser les cytokines
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