TD UE8 : vecteurs

[Camm]

Bonjour, est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer comment résoudre ce genre de QCM ? les items CDE sont pas du tout clair pour moi

merci !

Edited March 6, 2019 by Camm

[Sillianos]

Coucou, idem j'aimerai bien la justification du D et E car j'utilise la même méthode (que je détaille juste après), qui a pourtant fonctionné pour tous les qcm sauf celui-là (j'ai peut être mal recopié aussi c'est possible xD)

 

@CammDu coup je vais essayer d'expliquer au mieux avec ce que j'ai compris :

Je corrige tout :

 

A --> Faux : C'est pas les mêmes séquences (Isoschizo = Même séquence, à la base prêt et qui coupe au même endroit)

B --> Faux : Même justification

C --> Faux : Il y aura insertion dans les 2 sens car tu utilises la même enzyme (donc elle est forcément complémentaire) ! G/AATTC = G/AATTC

D --> Faux : T/CTAG/A (XbaI) et G/TCGA/C (SaII)  C/TCGA/G (Xhol)

Donc tu vois qu'entre SaII et Xhol y'a TCGA en commun donc ça va s'insérer dans les 2 sens !

E --> Vrai : T/CTAG/A (XbaI) et G/TCGA/C (SaII) - (BgIII) A/GATC/T

Hum, alors ici, tu vois que ça va s'insérer dans les 2 sens car :

XbaI + SaII soit respectivement CTAG et TCGA ira avec BgIII + Xhol (GATC et TCGA)

hors CTAG est différent de GATC donc ça s'insérera dans un seul sens !

 

En fait, si ça diffère avec le même nb de base, y'aura insertion dans 1 sens et si ça correspond parfaitement on peut le faire dans les 2 sens.*

Essaye de prendre le schéma comme exemple :

 

D'après ce que j'ai écris en TD il semblerait que D soit Vrai et E Faux mais.. c'est bizarre car comme dit juste avant, "ma méthode" a fonctionné tout le long.. !

Déso, j'explique hyper mal mais n'hésite pas à attendre la réponse d'un tuteur / doublant qui sera je l'espère bien plus précis ! ^^

 

Bye !

Edited March 6, 2019 by Sillianos

[Théobromine]

 

@Sillianos

 

 

 

Si vous avez des questions d'hésitez pas, @Camm tu es allée au td ? tout te sera bien expliqué

[Sillianos]

Ah oui, my bad, je vois mon erreur ! Merci @Théobromine

Je vais reprendre tout ça à tête reposée ça sera plus productif.

[Camm]

@Théobromine oui j'y suis allée mais j'avais toujours pas compris ça, mais c'est beaucoup plus clair maintenant merci beaucoup ! 

[Bilskur]

Bonsoir à tous

 

Même si ce sujet est déjà quasi résolu, vu qu'il n'y a pas de meilleure réponse, j'en profite pour refaire la technique de ce genre de QCMs  

 

Pour déterminer si votre cDNA peut s'insérer dans un seul sens ou dans les deux sens, il faut déterminer ses extrémités : 

S'il a les mêmes extrémités, il pourra s'insérer dans les deux sens d'un vecteur ouvert avec les bonnes enzymes de restriction. 

En revanche, si ses extrémités diffèrent, il ne pourra pas.  

 

Si je prends ces 6 enzymes en exemple : 

Alpha : T/CTAGA

Bêta : A/CTAGT

Gamma : C/GATCC

Delta : T/CATGA

Epsilon : C/ATG

Zêta : TCATG/A

 

Qu'est-ce qu'on peut en tirer?

Déjà, il faut regarder si vous avez des isoschizomères, donc deux enzymes qui reconnaissent la même séquence, et qui la coupent au même endroit  

Ici, il n'y en a pas, il faut bien faire attention, Delta et Zêta n'en sont pas! Elles ne coupent pas au même endroit, donc les extrémités laissées par ces deux enzymes serait différentes, et absolument pas congruentes. 

 

Ensuite il vous faut observer ce qui sera l'extrémité laissée par l'enzyme après son action. C'est ce que j'ai fait en laissant les bases en gras. 

L'extrémité c'est la séquence palindromique après la zone de coupure, donc la c'est soit les 4 ou les 2 bases qui suivent la zone de coupure, selon la taille du site reconnu par l'enzyme  

 

Ici, pour que le cDNA puisse être intégré dans le plasmide par les deux sens, il faudrait qu'il soit ouvert par Alpha, Bêta ou les deux (selon les sites de coupure disponibles), et s'insère dans le vecteur ouvert par Alpha, Bêta ou les 2 selon les sites présents dans le polylinker  

 

Sinon, si le cDNA coupé par exemple par Bêta et Zêta aura deux extrémités différentes, donc impossible pour lui de s'insérer dans les deux sens, parce qu'il est pas possible d'avoir une ouverture du vecteur qui puisse correspondre aux deux extrémités des deux côtés  

 

Révélation

J'ai pas trouvé mieux 

 

J'espère que c'est assez clair pour vous tous