Immunoprécipitation

[Amonbofis]

Salut, je ne comprends pas le principe de l'immunoprécipitation :

D'après le cours

-se forme un complexe protéines d'intéret/ Ac / prot. A de staphylocoque

-Les complexes sont précipités par centrifugation -> puis dissociation Prot/Ac de la prot A

-Puis on sépare le précipité et l'extrait initial

donc j'ai plusieurs zones d'ombres :

- à quoi sert la centrifugation ?

- à quoi sert la séparation par éléctrophorèse si on a centrifugué avant

-qu'est ce qui est comparé lors de l'électrophorèse ?

merci d'avance à celui qui peut me répondre !!

[Bestusernameever]

Yooo 

 

Donc pour chaque question : 

 

- la centrifugation permet de ramener le précipité dans le culot au lieu de le laisser flotter dans le liquide, tout simplement 

 

- La séparation par électrophorèse est faite pour comparer le poids moléculaire de ta protéine précipitée avec l'extrait de départ, ce qui va ensuite t'aider à caractériser ton Ac/ ton Ag ("je sais que cet Ac reconnaît un Ag de tel poids => peut être telle protéine") 

[Lilette]

Salut!

Alors la protéine A fixe le Fc de l'anticorps, ce qui forme un complexe microbille-protéineA-Ac, ce complexe va fixer la protéine d'intérêt.

Ensuite on centrifuge, ce qui va permettre de séparer l'extrait protéique (à la surface) des microbilles sur lesquelles est fixée la protéine d'intérêt (au fond du tube).

Puis on récupère les microbilles et on sépare les Ac des protéines d'intérêt.

Et on analyse ce qu'on a récupéré par électrophorèse.

 

L'avantage de cette technique comparé à l'immunotransfert, c'est qu'elle n'est pas dénaturante donc on peut l'utiliser pour repérer des épitoges conformationnels et séquentiels (attention l'électrophorèse après est dénaturante).

 

Voilà j'espère que c'est clair