plasmide

[DrR]

re,

je dans la partie sur le plasmide PUC, le prof a dis que "si c'est la même enzyme de restriction : on peut pas imposer le sens de l'insert" mais en relisant je comprends pas ce que voulais dire le prof ? est ce qu'il parlait de l'enzyme de restriction qui coupe et le vecteur et l'insert ? et sinon comment on détermine le sens ?

[Lilette]

Coucou!

Si tu utilises la même enzyme de restriction (ou des enzymes isoschizomères) sur le plasmide et le vecteur, les extrémités pourront toutes se recombiner entre elles donc tu ne pourras pas déterminer le sens d'insertion (et en plus les extrémités du vecteur risquent de se refermer sur elles-mêmes d'où l'utilisation de la phosphatase alcaline).

Pour déterminer le sens tu peux utiliser des enzymes de restriction différentes aux 2 extrémités du vecteur (et il te faut 2 extrémités différentes pour l'insert qui s'insèrent avec chaque extrémité du vecteur). 

Je sais pas si c'est très clair...

[DrR]

en gros si on utilise une enzyme pour une extremité du vecteur (compatible pour la même extremité de l'insert ?) et une autre pour l'autre extrémité (idem) , on peux déterminer le sens c'est ça ?

[Bilskur]

Salut  

 

En fait, si tu utilises pour ton insert deux enzymes de restrictions qui ne sont pas isoschizomères, tu vas avoir deux bouts différents de chaque côté de ton insert. 

Et comme tu as coupé ton plasmide avec des enzymes qui correspondent à ces bouts, il n'y aura qu'une seule possibilité pour que ton insert se mette dans son plasmide, et ainsi un seul sens possible. 

Alors que si tu as les mêmes bouts de chaque  côté de ton insert, tu ne peux pas prédire comment il va s'insérer  

 

C'est assez clair?