séléction des bactéries par résistance à antibio

[DrR]

coucou,

j'ai noté dans mon cours qu'on séléctionne les bactéries ayant intégré le plasmide recombiné en 2 étapes :

- résistance à un premeir antibio : on séléctionne les bact qui ont pu résister à l'antibiotique vu que le plasmide rec a un insert contenant une séq de résistance aux antibiotiques.

- la 2eme étape je comprends pas : j'ai noté qu'on met un insert au milieu du gène du plasmide codant pour la résistance : ducoup les vecteurs rec ont le gène de résistance détruit. Les bactéries qui intègrent le plasmide recombinant meurent ducoup on garde que celle qui ont pas le plasmide recombinant(=plasmide vide sans l'insert), ducoup quel est l'interet ? si on détruit les bactéries qui ont intégré le plasmide recombinant on fait comment ?

Merci

Edited February 26, 2019 by Docteurmrb

[TritonX100]

Slt Docteurmrb, 

 

Dans la technique dont tu parles, on sélectionne d'abord les bactéries ayant intégré un plasmide recombinant ou non ( la sélection est basée sur la résistance à un antibiotique, souvent l'ampicilline). Puis on sélectionne les bactéries ayant intégré un plasmide recombinant (ici en utilisant un deuxième antibiotique, la tétracycline) en effet les bactéries contenant le vecteur recombinant seront sensibles à cet antibiotique, c'est pourquoi cette méthode présente une contrainte qui est de réaliser une réplique avant de réaliser la sélection. On préférera utiliser lors de la deuxième étape une sélection basé sur la couleur, en utilisant un gène conférant une couleur aux colonie bactériennes.

 

N'hésites pas si t'as d'autres questions

[DrR]

il y a 55 minutes, TritonX100 a dit :

Slt Docteurmrb, 

 

Dans la technique dont tu parles, on sélectionne d'abord les bactéries ayant intégré un plasmide recombinant ou non ( la sélection est basée sur la résistance à un antibiotique, souvent l'ampicilline). Puis on sélectionne les bactéries ayant intégré un plasmide recombinant (ici en utilisant un deuxième antibiotique, la tétracycline) en effet les bactéries contenant le vecteur recombinant seront sensibles à cet antibiotique, c'est pourquoi cette méthode présente une contrainte qui est de réaliser une réplique avant de réaliser la sélection. On préférera utiliser lors de la deuxième étape une sélection basé sur la couleur, en utilisant un gène conférant une couleur aux colonie bactériennes.

 

N'hésites pas si t'as d'autres questions

merci pour ta réponse , mais si on fait une réplique avant comment on peux savoir si ces bactéries allaient intégrer le plasmide recombinant ou l'autre ?

et donc la coloration n'est pas une méthode à part ? Je pensai que soit on testait par résistance aux antibio ( en 2  étapes) ou par coloration ( 1 étape de coloration sans antibio) ?

@TritonX100

[Loorette]

Salut !

Justement on ne le sait pas et c'est pour ça qu'on fait toutes ces sélections !

Non justement, la méthode de la coloration est associée à celle de la résistance aux antibiotiques. Dans un premier temps avec la résistance aux antibiotiques tu vois si elles ont reçu un vecteur et la coloration (plutôt la non coloration) nous permet de savoir si elles ont inséré le vecteur recombinant.

En espérant t'avoir aidé

 

 

[TritonX100]

Pour ta question sur la réplique, j'espère que ce schéma va t'aider (après te prend pas trop la tete avec ça, ce n'est pas aussi détaillé dans le cours), il faut juste comprendre que lors de la deuxième méthode les bactéries ayant intégré un plasmide recombinant sont résistants à l'ampicilline et sensible à la tétracycline 

 

Alors en général la première étape est une sélection des bactéries ayant intégré un plasmide (recombinant ou non) par un antibiotique, puis vient la sélection des bactéries ayant intégré un plasmide cette fois ci seulement recombinant par un deuxième antibiotique ou en utilisant le gène Lac Z (les bactéries transformée par plasmide recombinant formeront une colonie blanche)