Poly tat 7 (vecteur-clonage)

[Florian]

Salut ! 

 

J'ai des questions sur le qcm 7 du pack du poly sur les plasmides : http://www.noelshack.com/2019-09-2-1551170639-capture.png

La correction

 

Je ne comprends pas comment on peut utiliser Acc651 pour l'insert et SunI pour le plasmide alors que les séquences reconnues sont différentes. Est ce que c'est car la partie entre les /… / est identique du coup on peut le faire ?  J'ai compris c'est bon en fait 

Deuxième question : comment on sait que si on coupe l'insert et le plasmide par PaeI l'insert s'insère dans un sens tandis que si on utilise PaeI sur l'insert et NlaIII sur le plasmide, l'insertion se fait dans l'autre sens ? Pour moi si on utilise PaeI sur l'insert et le plasmide alors l'insert pourra s'insérer dans les 2 sens et pas dans 1 seul sens 

 

Bonne journée 

Edited February 26, 2019 by Florian

[DrR]

Il y a 1 heure, Florian a dit :

Salut ! 

 

J'ai des questions sur le qcm 7 du pack du poly sur les plasmides : http://www.noelshack.com/2019-09-2-1551170639-capture.png

La correction

 

Je ne comprends pas comment on peut utiliser Acc651 pour l'insert et SunI pour le plasmide alors que les séquences reconnues sont différentes. Est ce que c'est car la partie entre les /… / est identique du coup on peut le faire ?  J'ai compris c'est bon en fait 

Deuxième question : comment on sait que si on coupe l'insert et le plasmide par PaeI l'insert s'insère dans un sens tandis que si on utilise PaeI sur l'insert et NlaIII sur le plasmide, l'insertion se fait dans l'autre sens ? Pour moi si on utilise PaeI sur l'insert et le plasmide alors l'insert pourra s'insérer dans les 2 sens et pas dans 1 seul sens 

 

Bonne journée 

ducoup t'as compris quoi stp ? (j'attendais la réponse aussi )

@Florian j'en profite pour te demander, pour la D, je comprends pas la correction. si les bactéries ont un plasmide recombinant avec l'insert dans le gene lac Z, il est désorganisé donc elles peuvent pas synthétiser la X galactosidase donc elles sont blanches et pas bleues non ?

[Bilskur]

Helloo ! 

 

Pour ce qui est de SunI et Acc651 c'est exactement ce que tu as dit, il faut que les séquences entre les // soient les mêmes, le reste est en fait toujours apparié aux bases de l'autre brin. 

 

Pour la deuxième question, la digestion par PaeI uniquement ne coupe pas ailleurs qu'à l'extrémité 5', l'insertion ne se fera que si on le digère de l'autre côté par Acc651 ou NcoI, et c'est ça qui va conditionner le sens de l'insertion. Après je suis d'accord avec toi pour dire que si il y avait un site de restriction PaeI aux deux extrémités de la séquence à insérer elle pourrait s'insérer dans les deux sens. 

 

@Docteurmrb Ici on n'insère pas le plasmide sur un gène lacZ pour le désorganiser mais le contraire : on insère un gène lacZ avec le gène d'intérêt (c'est pour ça qu'il sont côte à côte dans la séquence de l'insert). Donc on va prendre une bactérie dépourvue du gène lacZ qui va le récupérer par l'insertion du plasmide, créant des bactéries bleues. 

 

 

[Florian]

Salut à vous deux ! 

 

Il y a 4 heures, Bilskur a dit :

Pour la deuxième question, la digestion par PaeI uniquement ne coupe pas ailleurs qu'à l'extrémité 5', l'insertion ne se fera que si on le digère de l'autre côté par Acc651 ou NcoI, et c'est ça qui va conditionner le sens de l'insertion. Après je suis d'accord avec toi pour dire que si il y avait un site de restriction PaeI aux deux extrémités de la séquence à insérer elle pourrait s'insérer dans les deux sens. 

Ah oui ok, ca marche merci ! 

 

Il y a 5 heures, Docteurmrb a dit :

j'en profite pour te demander, pour la D, je comprends pas la correction. si les bactéries ont un plasmide recombinant avec l'insert dans le gene lac Z, il est désorganisé donc elles peuvent pas synthétiser la X galactosidase donc elles sont blanches et pas bleues non ?

Comme l'a dit Bilskur, c'est inversé par rapport au cours, tu as cette information dans le qcm précédant ou celui encore avant il me semble 

 

Bonne fin de journée à vous deux 

[DrR]

merci beaucoup !!