Mélie Posted April 27, 2014 Posted April 27, 2014 Bonjour, I ll y a un item du TD qui me pose problème ! L'énoncé est le suivant "Des chercheurs ont utilisé un vecteur afin d'inhiber l'expression de la protéine RhoB dans des cellules pulmonaires. Ils ont utilisé 2 constructions différentes dirigées contre l'ARNm de RhoB (Shb1 et Shb2) pour évaluer l'efficacité de leurs shARN." En fait je ne comprends pas pourquoi l'item c) l'expression de shARNB1 et shARNB2 est constitutive est corrigé vrai Je ne vois pas quels sont les indices qui permettent de le déduire, comment peut-on savoir si le promoteur est régulé ou non ? Merci d'avance !
Mélie Posted April 27, 2014 Author Posted April 27, 2014 Ah zut il y a autre chose ! Dans l'énoncé suivant : "Des chercheurs ont modifié génetiquement des cellules humaines d'adénocarcinome ovarien par un vecteur viral AdRhoB. Ce vecteur code à la fois la protéine RhoB et la protéine fluorescente GFP" je ne comprends pas l'item c : La construction génique qui a permi de réaliser le vecteur viral comprend au minimum 2 cadres de lecture ouverts eucaryotes (corrigé vrai) En fait ce qui me pose problème c'est que je n'arrive pas à savoir si RhoB et la GFP sont fusionnées ou non ^^ Dans le premier cas, j'aurais tendance à dire qu'il n'y a qu'un seul cadre de lecture. Alors que dans le second, il y a 2 promoteurs et 2 cadres de lecture différents ? Est-ce que mon raisonnement tient la route ou je n'ai pas bien saisi la définition d'un cadre de lecture ? Dernière chose : je me rends compte que je n'ai pas trés bien compris comment on procédait avec les enzymes de restriction et tout le bazar pour construire le vecteur d'expression ! Je m'embrouille et je ne sais pas dans quel ordre le promoteur, le gène et le terminateur sont insérés dans le vecteur :/ Si quelqu'un avait l'amabilité d'éclaircir un peu tout ça en me décrivant les différentes étapes (si ce n'est pas trop demander) , ça serait un gros soulagement pour moi ! Merci de votre aide
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