PB de compatibilité enzyme de restriction

[Jou222]

Bonjour, 

Je reprends un post qui a déjà été posé avec une question un peu différente..

Je ne comprends pas dans ce QCM comme l'item A peut être vrai, car en considérant que Acc I est compatible avec TaqI er ClaI, si on digère par AccI est on sur en sachant cela que le fragment sera inséré dans le bon sens?

[TICTAQ]

Coucou,

 

Ici tu ne coupes que par AccI et EcoRI, ces sites ne se retrouvent qu'une seule fois dans le fragment et ne sont pas compatibles entre eux.

 

Ce qui te gène je pense c'est l'ordre des sites sur ton plasmide ?

 

Si on te dit bonne orientation en fait c'est qu'on veut que le fragment soit dans une seule position, ici tes sites sont dans un ordre précis sur le plasmide, si tu insères le fragment avec tes 2 enzymes de restriction (ACCI et ECORI) il sera inséré dans un seul sens possible (même si c'est pas le sens qu'on aurait pensé en voyant le fragment) c'est sûrement le sens voulu, pour que le +1 soit bien au bon endroit (on choisi comment on veut mettre nos sites de restriction sur le fragment lorsqu'on le développe).

 

Si ce qui te gêne c'est le fait d'utiliser ACCI et ECORI en sachant que d'autres sites existent il faut bien voir qu'on n'utilise pas d'autres enzymes, tu n'utilises que les 2 précisées donc tu n'as pas de problème de compatibilité puisqu'elles ne coupent qu'a un seul endroit chacune le plasmide et le fragment  

 

 

J'espère avoir été assez claire, dis moi si tu n'as pas compris

 

courage !

 

 

[Jou222]

Donc si on utilise AccI on ne risque pas de couper un dans le site de restriction d'une des autres enzymes compatible à AccI?

En fait mon pb est plutôt le suivant:

En admettant qu'une séquence "de restriction" reconnue par une enzyme A soit comprise dans la séquence d'une autre enzyme de restriction B, si on utilise cette enzyme B on ne risque pas de couper au site de restriction A en plus (et donc couper 2 fois ce qui ne va pas)?

Si les enzymes sont compatibles on ne risque pas cela @TICTAQ?  

 

Edited January 6, 2019 by Jou222

[TICTAQ]

En effet ta phrase est juste dans ce sens, mais ici nous sommes dans la cas inverse, B peut couper dans A mais A ne coupe pas dans B.

 

Ce qui fait que AccI ne coupe qu'à son propre site de restriction, et que les enzymes qui lui sont compatibles couperont bien dans leur propre site en plus de celui-ci. Mais en utilisant que AccI (ou B) tu n'aura pas de coupure dans les autres enzymes compatibles (à part si B rentre lui même dans une autre enzyme C)

 

Est ce plus clair ?

[Jou222]

@TICTAQ Ok donc en fait il faut que l'intégralité du site de restriction de B(AccI) soit retrouvé dans le site de restriction d'une autre enzyme C pour que B coupe aussi dans C c'est bien ça?

 

[TICTAQ]

Exactement ! Et dans ce cas là A pourrait aussi couper dans C  

 

J'espère que ces lettres ne t'ont pas embrouillés et que tu as compris qu'il faut retrouver tout le site de restriction pour que ton enzyme coupe  

 

[Jou222]

C'est compris! Merci beaucoup @TICTAQ