Shik Posted December 29, 2018 Posted December 29, 2018 Salutations ! A propos de ces items : Citation 18 Les oligonucléotides de synthèse sont : c) généralement dépourvus de groupement phosphate en 5’ lors de leur synthèse vrai d) toujours déphosphorylés avant d’être marqués en 5' vrai b); c) et e) Il sont synthétisés en commençant par l'extrémité 5’ dépourvue de groupement phosphate en 5’ lors de leur synthèse ou bien ils sont déphosphoryiés avant d’être marqués. Je voulais savoir si ça a été dit en cours et/ou il y a t'il une diapo qui en parle s'il vous plait ! Je n'ai pas noté cette précision et je comprend pas pour quelle raison les oligosondes de synthèse sont sans phosphate. Merci d'avance pour tout éclaircissement ! Quote
Solution Roux-carnage Posted December 30, 2018 Solution Posted December 30, 2018 Salut ! Alors oui y'a 3-4 diapos dans le cours sur les techniques qui parlent de ça (en tout cas sur les diapos de l'année dernière). Du coup oui les oligonucléotides de synthèse sont souvent non phosphorylés en 5'. Pourquoi ? Pour que justement si on a besoin de marquer cet oligonucléotide, on puisse le faire en 5'. Les diapos disent: - Marquage d'un acide nucléique déjà constitué: action d'une phosphatase pour enlever les phosphates éventuellement présents en 5' ; puis action d'une kinase qui rajoute un ou plusieurs groupements phosphates marqués radioactivement. Comme ça, si initialement on synthétise des oligonucléotides sans phosphate en 5', on a pas besoin de faire agir une phosphatase avant le marquage par la kinase. - Marquage au cours de la synthèse d'un acide nucléique: pour ce qui est du marquage en 5', il suffit de synthétiser en présence de nucléotides radioactifs marqués sur le phosphate ɣ. Donc les oligonucléotides de synthèse sont souvent non phosphorylés en 5'. Mais les oligosondes sont souvent marqués sur les phosphates en 5'. (⚠︎ le marquage en 5' n'est pas la seule possibilité: on peut aussi marquer tout le long du brin, ou en 3',...) J'espère t'avoir un peu éclairci sur le sujet Bonnes révisions ! Quote
Manolita Posted December 31, 2018 Posted December 31, 2018 @Roux-carnage Donc ça serait bien compté faux si on disait que les oligonucléotides de synthèse était toujours non phosphorylés en 5' ? Quote
Roux-carnage Posted December 31, 2018 Posted December 31, 2018 Pour moi oui ce serait faux car tous les oligonucléotides de synthèse ne servent pas à faire du marquage. Ils peuvent aussi servir d'amorces,... Quote
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