phosphatase alcaline

[fannymeli72]

Bonjour, je ne comprend pas très bien où la phosphatase alcaline agit sur le plasmide 

 

Dans certains QCM, il est noté qu'on enlève le phosphate du plasmide et sur d'autre QCM le phosphate du produit de PCR. Est ce que le produit de PCR est bien le fragment que l'on va inséré ou est ce qu'on considère le plasmide comme le fragment? 

J'avais une autre question concernant les enzymes de restriction. Lorsque l'enzyme EcoRI (ou une autre) et smaI (ou une autre) coupe une première fois le plasmide pour l'ouvrir et insertion d'un fragment, puis on fait la ligation. Est ce qu'après c'est possible que ses même enzymes agissent encore et coupe le plasmide? 

[jpmeao]

salut !!

 

alors concernant la suppression du phosphate c'est bien sur le fragment = produit de PCR.

Tu vas donc avoir des extrémités 5' déphosphorylées.

 

Si tu utilise ECORI pour couper ton plasmide et que tu insère ton fragment également coupé par ECORI sur ses deux extrémités : oui tu pourras toujours utiliser ECORI pour couper!

En revanche, si tu utilise d'autres enzymes de restriction sur ton produit de PCR alors il faudra vérifier, par exemple si ton plasmide a été coupé par ECORI et que tu insère ton fragment avec un bout correspondant à SMAI, il se peut alors que tu ne puisse plus couper avec ECORI (et généralement c'est ce qui se passe)

[fannymeli72]

Okay, merci beaucoup pour ta réponse