Questions courtes poly génome (3eme partie)

[ClaraF]

Coucou!!!!!!

 

J'ai juste trois petites questions de cours, que je n'avais rien noté et du coup, pour compléter mes cours est-ce que quelqu'un pourrais me dire si c'est bien ça? 

 

Alors pour le QCM 18, c'est par rapport aux Puces à ADN: 

 

Pour la B, j’avais noté, de ce qui avait dit père Langin, qu'on greffait les oligo ou ADNc dans une lamelle. Donc, dans ma tête c’était une lamelle de verre, mais la c'est marqué vrai pour le support a nylon. Du coup, ça marche avec les deux supports?

Et pour la C, (marqué Faux) , est-ce que c'est à cause de la taille du fluorophore? 

 

Et le dernier QCM, (marqué faux)

 

En fait mes notes sur la Taq sont assez brèves, et la je ne sais pas si la justification c'est parce que ce n'est pas une exonuclease mais une endonuclease, o rien du tout. 

 

 

Mil millions de merci en avance, et super joyeux noël!!! 

[Luciférine]

Salut @Pamplemousse ! 

il y a 21 minutes, Pamplemousse a dit :



Pour la B, j’avais noté, de ce qui avait dit père Langin, qu'on greffait les oligo ou ADNc dans une lamelle. Donc, dans ma tête c’était une lamelle de verre, mais la c'est marqué vrai pour le support a nylon. Du coup, ça marche avec les deux supports?

Et pour la C, (marqué Faux) , est-ce que c'est à cause de la taille du fluorophore? 

Pour la B je n'ai rien là-dessus, aucune certitude donc je préfère laisser quelqu'un d'autre répondre à ma place ! 

 

Pour la C je dirai que tu as raison, pour moi c'est plus facile d'incorporer de l'ADN 32P que de l'ADN marqué avec un fluorophore parce que le fluorophore est gros  

 

il y a 23 minutes, Pamplemousse a dit :

La TAQ ADN polymérase est très peu fidèle, elle ne corrige pas ses erreurs ! 

C'est pour ça que on l'utilise seulement quand être fidèle nous importe peu  

 

Joyeux Noel à toi ! 

 

[ClaraF]

Merci beaucoup @Luciférine!!! 

 

Ça fait beaucoup de sens en fait le truc de la Taq  merci!! 

 

[Magnum]

Salut @Pamplemousse

B) On peut greffer sur du nylon ou verre indifférement! 

C) J'avais répondu à cet item : 

E) Je sais pas trop.. On considère oui qu'elle n'est pas très fidèle à cause de ça, mais on peut voir un peu ailleurs qu'il y a une activité exo.. Mais il faut retenir du coup qu'elle n'en a pas

Au plaisir  

[ClaraF]

Coucou @Magnum!

 

Merci beaucoup je retiens tout ça donc! 

 

(Je n'avais pas trouvé le post du fluorophe )  

 

[Kermit]

Salut 

je voulais rajouter un petit truc pour l'item C, même si je suis d'accord avec le message disant que incorporer un p32 c'est simplement incorporer un P d'habitude mais que le fluorophore c'est gros tout ça 

 

Pour moi le but même des puces à ADN c'est de faire des différences entre les différents ARNm produits par les deux patients (qu'on fait passer en ADNc bien entendu)

On marque l'un avec une couleur (rouge par ex) et lautre avec une autre couleur (vert) et on regarde les hybridations sur les amorces du coup le rôle de la couleur est primordiale dans le rôle de la puces si les deux couleurs apparaissent dans le puit ou si ce n'est qu'une seule des deux pour identifier possiblement les gens / protéines responsables d'une pathologie ou identifier une mutation 

 

Or le marquage au p32 n'est pas spécifique du tout et ne permettrait pas de donner des informations en présences de deux (ou de plusieurs) séquences.

 

Pour les curieux : le marquage au p32 est plus utilisée pour la technique ASO où l'on fait un marquage de séquence d'ADN d'une même provenance pour savoir si une mutation est présente ou non selon des hybridations très spécifiques de sondes 

 

La réponse d'un tuteur ou d'un RM est la bienvenue 

 

[TICTAQ]

Coucou !!

 

Pour tes 3 questions :

 

1. Je confirme que le support peut être soit un support de Nylon soit une lamelle de verre. 

 

2. Concernant l'efficacité supérieure du fluorophore je confirme aussi la réponse qui avait été donnée par Magnum sur le même post. 

 

3.  La Taq polymerase est une ADN polymérase thermostable (72°C), il faut comprendre que ses seules capacités sont de polymériser, qu'elle n'est pas utilisée comme une ADN polymerase fidèle dans les PCR, de part la non-correction des erreurs notamment.

 

Pour compléter la réponse de Kermit concernant l'item C :

 

Les puces à ADN sont une technique de détection de différents ADN ou ADNc (provenant d'ARNm). Cela permet de comparer des ADN entre deux individus par exemple, pour cela on marque des oligonucléotides spécifiques par des fluorochromes différents (Vert et rouge par exemple).

On hybride les fragments avec les oligonucléotides (+ fluorochromes) sur la même plaque, et on obtient différents points, soit rouge, soit vert, soit Jaune (correspondant à l'hybridation des 2 couleurs donc l'ADN est similaire entre les 2 individus). Cette technique est très spécifique et permet de trouver les différences entre les ADN d'une personne malade et d'une non malade par exemple (mutations etc...) grâce aux différentes couleurs. Il est donc absolument nécessaire d'utiliser des fluorochromes ici.

 

La technique ASO utilise la technique du Dot-plot : Il n'y a besoin que d'une couleur, l'utilisation de P32 pour les sondes spécifiques est donc suffisante (la radioactivité entraîne le blanc ou le noir). Tu obtiendras des puits soit noir (hybridés) soit blanc (non hybridés)

Mais la technique ASO n'est pas à savoir il me semble ?

 

J'espère que ces confirmations vous conviennent 

 

Joyeux Noël à vous ! 

 

[ClaraF]

Merci beaucoup @TICTAQ et @Kermit!! 

 

Du coup je retiens tout cela! C'est très gentil  

 

Joyeux Noël à toi aussi!