Magnum Posted October 12, 2018 Posted October 12, 2018 (edited) Bonjour ttw Petite question qui me trotte on the haricot A partir de la page 117 —> on dit que l’on mets un ADNc dans un plasmide etc.. —> ensuite on fait une amplification de bactéries, qui amplifie mon plasmide avec ... mon ADNc? (120) —> lysat bactérien —> et on isole ADN plasmidique Et c’est ici que ce pose le problème Diapo suivante (123) on décide d’amplifier cet ADN plasmidique en le mettant dans une bactérie, qui permettra de le multiplier Je comprendrais si on parle d’un plasmide qui ne se trouve pas dans une bactérie or les plasmides se trouvent dans les bactéries.. Ma question est du coup, pour insérer un ADNc dans un plasmide, on est obligé de l’extraire de sa bactérie ? Ce qui expliquerai que l’on soit obligé de le réinsérer dans une bactérie ... J’ai raisonné en partant du plasmide d’une bactérie, car c’est ce que le prof semble dire que diapo 120/121 (que l’on multiplie nos bactéries de fait nos plasmides) Mais j’ai remarqué sur la diapo 117 : Plasmide sauvage Où trouve t’on des plasmides sauvages ? Si plasmides sauvages veut bien dire plasmide seul Désolé pour le post un peu long .. Merci Edited October 12, 2018 by Magnum Quote
Ancien du Bureau Jeromine Posted October 12, 2018 Ancien du Bureau Posted October 12, 2018 Si j'ai bien compris les plasmides sauvages n'ont justement rien de sauvage. Ils ont été modifiés, simplifiés au maximum. Ils contiennent seulement -le matériel génétique nécessaire à leur reproduction -le MCS (le "multipass" pour y inclure tout ce qu'on veut) -le code de résistance à l'ampiciline (utilisé ensuite pour selectionner les bacteries qui les ont intégrés) Du coup j'imagine qu'on se les procure en les achetant à un labo, du coup ils seraient tout seuls sans bactérie pour leur tenir chaud... Évidemment ssi j'ai bien compris Quote
Sternocleidomastoidien Posted October 12, 2018 Posted October 12, 2018 (edited) Salut! Enfaite d'après moi on trouve des plasmides au niveau de n'importe quelle bactérie de notre corps mais le MCS est très bizarre --> elles permettent a la bactérie de se défendre. La nuance arrive maintenant d'après moi, l'homme à synthétiser des plasmides spéciaux "sauvages" contenant un unique MCS où les enzymes de restriction coupe une fois dedans afin d'amplifier facilement de l'ADN. L'interet maintenant est d'utiliser ce plasmide, de l'ouvrir simplement et d'y insérer l'ADNc qu'on veut multiplier. Jsp si j'ai été clair Edited October 12, 2018 by Spif_Le_Spationaute Quote
Ancien du Bureau Jeromine Posted October 12, 2018 Ancien du Bureau Posted October 12, 2018 il y a 3 minutes, Spif_Le_Spationaute a dit : d'après moi on trouve des plasmides sauvages au niveau de n'importe quelle bactérie de notre corps D'après moi c'est l'exact inverse en cours on a insisté sur le côté contre-intuitif de la "sauvagerie" du plasmide... Quote
Magnum Posted October 12, 2018 Author Posted October 12, 2018 (edited) D’accord ! Donc jusque là je vous suis Mais diapo 120, intitulé « amplification des plasmides » n’a rien d’une amplification du plasmide que l’on vient de préparer. Ca serait juste une amplification de bactérie pour accueillir le plasmide (((Parce que pour moi si on multiplie la bactérie (qui contient le plasmide modifié) on multiplie aussi son plasmide))) Ok, mais alors pourquoi diapo 122, on isole l’ADN plasmidique si on a déjà un plasmide sauvage contenant notre ADNc.. Pas besoin d’isoler quelque chose que l’on a déjà « seul » Vous voyez la où je veux en venir ? Edited October 12, 2018 by Magnum Quote
Sternocleidomastoidien Posted October 12, 2018 Posted October 12, 2018 il y a 11 minutes, Jeromine a dit : D'après moi c'est l'exact inverse en cours on a insisté sur le côté contre-intuitif de la "sauvagerie" du plasmide... J'ai inversé en tapant mais je pensais comme toi j'ai d'ailleurs directement modifié ahah Quote
elisacc Posted October 12, 2018 Posted October 12, 2018 (edited) Moi je pense que : un plasmide sauvage c'est pas le plasmide que tu trouves dans une bactérie lambda, "sauvage" c'est pcq on a pas encore inséré l'ADNc, mais il est bien sûr très modifié, pour le modifier il est tout seul, donc les plasmides sauvages sont pas contenus dans des bactéries! apres on le réinsère dans une bactérie pour qu'il se multiplie ! (tu te prends le chou on trouve avec @jpmeao, mais tqt c'est typique de notre signe astro) en en fait tu nous as embrouillé merci , mais les diapos sont pas vraiment dans l'ordre, c'est d'abord clonage, puis transformation, ensuite culture, Edited October 12, 2018 by elisacc Quote
Ancien du Bureau LoutrePéda Posted October 12, 2018 Ancien du Bureau Posted October 12, 2018 il y a 2 minutes, elisacc a dit : Moi je pense que : un plasmide sauvage c'est pas le plasmide que tu trouves dans une bactérie lambda, "sauvage" c'est pcq on a pas encore inséré l'ADNc, mais il est bien sûr très modifié, pour le modifier il est tout seul, donc les plasmides sauvages sont pas contenus dans des bactéries! apres on le réinsère dans une bactérie pour qu'il se multiplie ! (tu te prends le chou on trouve avec @jpmeao, mais tqt c'est typique de notre signe astro) Alors, pour info on parle de plasmide sauvage comme un plasmide qui a pas été simplement modifier (ou que le vecteur voulu n'est pas intégrer), les bactéries peuvent contenir des plasmides sauvages, on peut d'ailleurs faire une sous sélection (après l'ampliciline) à l'aide de l'ADNc de la B-galactosidase dans le plasmide et un agent qui est coupé par cette enzyme pour faire une reaction bleuté les colonie bleu sera avec des bactéries avec un plasmide sauvage et les bleu avec le plasmide contenant cette ADNc Quote
Ancien du Bureau Jeromine Posted October 12, 2018 Ancien du Bureau Posted October 12, 2018 On a depuis le début l'ADNc qu'on recherche. On veut le MULTIPLIER. Sinon pourquoi s'emm***er à le mettre dans un plasmide en premier lieu ?? 1 On l'a tout seul -> On le met dans un plasmide sauvage (hors bactérie) Le plasmide est à la bactérie ce que la mitochondrie est pour nos cellules, il est incapable de se reproduire si il est "sauvage", tout seul.. Donc 2 On le remet dans une bactérie (en tout cas on essaie : taux de réussite faible) 3 On trie les bactéries -> on obtient des bactéries avec plasmide isolées 4 On les laisse se multiplier 5 On récupère les plasmides (et il y en a beaucoup plus qu'au début, donc aussi beaucoup plus de notre ARNc -> objectif atteint) Quote
Magnum Posted October 12, 2018 Author Posted October 12, 2018 (edited) D’accord d’accord bon déjà merci à tous pour vos explications sur le plasmide sauvage, mais ce n’etait pas la question numero uno Je vais la reformuler Diapo 120: qu’est-ce qu’on amplifie alors ? Des bacteries y? Des bactéries qui ont notre plasmides avec notre ADNc? Puisque diapo 122 : on isole le produit de cette amplification qui est notre ADNc Alors pourquoi la diapo 123 est-elle la? Et ce n’est pas le concept de mettre un plasmide dans une bactérie pour le multiplier que je ne comprends pas, mais plus les diapos en fait ... ahah Edited October 12, 2018 by Magnum Quote
elisacc Posted October 12, 2018 Posted October 12, 2018 (edited) @Magnum les diapos sont pas vraiment dans le bon ordre pour moi oui on amplifie des B pour amplifier les P avec l'ADNc Edited October 12, 2018 by elisacc Quote
Ancien du Bureau LoutrePéda Posted October 12, 2018 Ancien du Bureau Posted October 12, 2018 Je répondait au dernier commentaire ^^ La diapo 120 à 121 t'explique simplement la mise en place de culture et de multiplication de bactéries. La diapo 122 te montre comment isoler ton Adn d'intérêt (pour l'utiliser à des fins d'études diverse avec lesquelles langin fera un plaisir de faire des exos haha) Et la diapo 123 te précise que pour intégrer les plasmides il te faut des bactéries compétentes et un choc thermique pour aider à les faire rentrer de force (y'aura normalement à la fin du cours de génome un petit recap de toute les techniques de transfections si jamais) et la on te dit qu'après la même mise en culture bactérienne pour la transformation bactérienne ben c'est que enfaite dans la vrai vie (experience) on obtient pas bcp sur le total de bactéries avec notre plasmide (de plus comme j'ai dit précédemment, il est possible de retrouver des bactéries avec le plasmide n'ayant pas le vecteur que l'on cherche, on verra ça un peu plus tard) il y a 1 minute, elisacc a dit : @Magnum les diapos sont pas vraiment dans le bon ordre pour moi oui on amplifie des B pour amplifier les P avec l'ADNc Ils sont dans le bonne ordre si on comprend le resonnement et les explications du profs, il désorganise parfois son schéma de résonnemment mais ça change pas grand chose sur le papier Quote
Magnum Posted October 12, 2018 Author Posted October 12, 2018 (edited) C’est ce que je pense aussi @elisaccje trouverai déjà un peu plus de logique.. pourtant c’est l’ordre que l’on a fait en cours, il doit bien avoir un lien. Langin nous a fait une Langin Merci @Danil ! Les infos des diapos sont à piocher et à se refaire l’histoire de l’amplification de l’adnc Edited October 12, 2018 by Magnum Quote
elisacc Posted October 12, 2018 Posted October 12, 2018 Oui @Danil, mais quand tu y réfléchis et tout, c'est pas tellement dans l'ordre je trouve, j'avais tres bien compris a la base Quote
Ancien du Bureau LoutrePéda Posted October 12, 2018 Ancien du Bureau Posted October 12, 2018 à l’instant, Magnum a dit : C’est @elisacc Merci @Danil ! Mais tu es d’accord que dans le cheminement du cours, 120-121-122-123 la manière dont c’est présenté c’est pas fou Effectivement il aurait déjà dû expliquer la transformation et la transfection dans une bactérie puis le reste ça aurait été plus simple Quote
Magnum Posted October 12, 2018 Author Posted October 12, 2018 il y a 1 minute, elisacc a dit : j’avais tres bien compris a la base Ahahaha hop Merci les amis @Jeromine @Spif_Le_Spationaute @Danil @elisacc C’est plus clair ! Juste quelqu’un aurait une définition universelle pour le plasmide sauvage ? Parce que dans les messages du coup on dit un peu tout et son contraire, que l’on s’accorde tous sur une définition Quote
Ancien du Bureau LoutrePéda Posted October 12, 2018 Ancien du Bureau Posted October 12, 2018 (edited) Plasmide sauvage = plasmide non cloné (sans ADNc) Qui sera présent dans des bactéries (donc elles acquièrent seulement le caractère de résistance du gène) ou utiliser afin d'être cloner avec ADNc et reimplanter. Voilà pour faire simple @Magnum, juste retient la grosse différence entre sauvage et cloné dans une bactérie Edited October 12, 2018 by Danil Quote
Ancien du Bureau LoutrePéda Posted October 12, 2018 Ancien du Bureau Posted October 12, 2018 (edited) Pour résumé sur ce qui se passe lors de transformation incerclan tout les cas que j'ai dit (plasmide cloné intégré, plasmide non cloné = sauvage intégré et pas d'intégration) il y a 43 minutes, Danil a dit : Alors, pour info on parle de plasmide sauvage comme un plasmide qui a pas été simplement modifier (ou que le vecteur voulu n'est pas intégrer), les bactéries peuvent contenir des plasmides sauvages Edited October 12, 2018 by Danil Quote
Recommended Posts
Join the conversation
You can post now and register later. If you have an account, sign in now to post with your account.
Note: Your post will require moderator approval before it will be visible.