Ancien du Bureau LoutrePéda Posted October 11, 2018 Ancien du Bureau Posted October 11, 2018 Bonsoir ! Question par rapport à l'intégration d'une ADNc dans un plasmide, sachant qu'il faut déphosphoryler (pour empêcher l’auto-fermeture du plasmique) avec l'ouverture d'une enzyme. Dans le cas où l'on utilise 2 enzymes permettant d'habitude de sauter cette étape, faut-il faire attention sur le fait de la compatibilité de ces enzymes pour l'ouverture du plasmique. Ex si j'utilise une enzyme A et B qui coupent en reconnaissant des séquences différentes et qui sont compatibles. Y'aura-t-il le même phénomène d'autofermeture qui est envisageable ? Et si oui, faut-il déphosphoryler le plasmide comme dans le cas d'une enzyme ? Quote
Solution Lucious Posted October 12, 2018 Solution Posted October 12, 2018 Salut @Danil Si les sequentes des deux enzymes de restriction sont différentes mais compatibles oui il faut déphosphoryler, c'est très important. Sinon ton ADNc n'aura peut être pas l'occasion de s'insérer, et si ton plasmide se referme tu auras en plus une nouvelle séquence différente des deux enzymes avec lesquelles tu as coupé et là faut tout recommencer ! Quote
Ancien du Bureau LoutrePéda Posted October 12, 2018 Author Ancien du Bureau Posted October 12, 2018 il y a 21 minutes, Lucious a dit : Salut @Danil Si les sequentes des deux enzymes de restriction sont différentes mais compatibles oui il faut déphosphoryler, c'est très important. Sinon ton ADNc n'aura peut être pas l'occasion de s'insérer, et si ton plasmide se referme tu auras en plus une nouvelle séquence différente des deux enzymes avec lesquelles tu as coupé et là faut tout recommencer ! OK, merci @Lucious pour ton aide Quote
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