Marquage molécules

[BOBIS]

Bonjour ! 

 

Est ce que quelqu'un voudrait bien m'expliquer le marquage des différentes molécules... Parce que dans les qcm les question sur le marquage des protéines, d'NTP, dNTP, de l'ARN ... sont vraiment très fréquentes et je ne sais jamais comment savoir quelle molécule est nécessaire au marquage et les condition d'utilisation (alpha, gamma, désoxyribonucléique ou non ...)surtout que je e trouve ps grand chose dans mon cours ...

 

Merci d'avance !

[Soleneuh]

@BOBIS on va le voir au prochain cours (surement demain),

-pour marquer un ADN en cours de synthèse il faut des dNTP marqués en alpha,

-et pour marquer un ADN seulement à ses extrémités, on utilise une protéine kinase qui se sert de l'ATP marqué en gamma

[BOBIS]

merci @solenefdo 

Et est ce que tu sais ce qu'on utilise pour les protéines et l'ARN ?

Edited October 8, 2018 by BOBIS

[Soleneuh]

Je sais pas si on le voit en génome, peut être en biomol pour les protéines, et pour les ARN je suppose que c'est la même chose, sauf qu'on utilisera des NTP et non des dNTPs ^^

[BOBIS]

D'accord merci @solenefdo

[Valou31]

Bonjour @BOBIS ! Pour compléter ce qu'as dit @solenefdo , vous aller voir la méthode du Random priting(diapo 103) où après dénaturation ,on ajoute des dNTPs dont de l' [ α³²P]dCTP  ,des Hexadésoxynucléotides( ce sont des amorces) ainsi que l'ADN pol I(Que le fragment de Klenow, le prof expliquera bien pourquoi). Cette méthode permet de marquer l'ADN, surtout des fragments de grandes tailles . 

On peut aussi utiliser la polynucleotide kinase , pour marquer en 5' des morceaux plus court d'ADN. Après dénaturation , une phosphatase alcaline va enlever les Phosphore en 5' , ce qui permettra à la polynucleotide kinase d'incorporer des P radioactifs [γ³²P] à la place!

Pour les ARN on utilisera bien des NTP marqué sur la Pα alors que pour les protéines on utilisera un ATP marqué en γ

[Soleneuh]

il y a 17 minutes, Valou31 a dit :

alors que pour les protéines on utilisera un ATP marqué en γ

 Voilà c'est ce qui me manquait merci beaucoup @Valou31 pour ces précisions  

[BOBIS]

Merci beaucoup @Valou31