Aminopeptidases et technique du DNFB

[Océane1110]

Bonjour! 

 

J’ai du mal à comprendre, le clivage par des exopeptidases comme par exemple les amino peptidases permet de séquencer et de déterminer l’acide aminé terminal, mais alors à quoi sert le Di Nitro Fluoro Benzène ? 

Je pensais que les amino peptidases dégradaient le reste de la chaîne contrairement au DNFB mais le professeur a dit ce matin qu’il était possible de faire un séquencage prolongé avec celles ci

Merci d’avance!

[MathildeD]

Salut,

alors si ta question porte sur le rôle du Di-Nitro-Fluoro-Benzene, il permet de déterminer l'AA N-terminal (donc celui au début de ton enchaînement). Si dans un énoncé par exemple on te dit : "l'action du Di-Nitro-Fluoro-Benzene libère successivement une DNP-Ala puis DNP-Leu" alors tu sauras que ton enchaînement commence par une Alanine, puis qu'il y a une leucine. C'est pour ça que ça te permet de faire du séquençage, le DNFB "détache" un par un les AA en N-terminal. 

 

J'espère que c'est plus clair

Edited October 1, 2018 by mathildedlvc

[Océane1110]

D’accord merci beaucoup d’avoir répondu!! Et du coup les amino peptidases ont le même rôle ?

[marie-a81]

@Océane1110, les aminopeptidases, comme leur nom l'indique grâce au préfixe AMINO, permettent de cliver l'AA N-terminal, contrairement aux CARBOXYpeptidases qui elles permettent de déterminer l'AA C-terminal. 

 

Apres, je ne sais pas si le séquence est réalisable avec toutes les aminopeptidases, ou si c'est uniquement avec le PITC ou DNFB mais si M. PERRET l'a dit alors c'est qu'on doit le considérer comme vrai.

 

Si quelqu'un pouvait le préciser se serait super sympa !

Edited October 2, 2018 by marie-a81

[Océane1110]

Merci Marie!! Voilà c’est ce que je me demandais Je pense que les amino peptidases ne fonctionnent pas sur tous les acides aminés à cliver et c’est là que les autres techniques interviennent mais ce n’est qu’une supposition 

[marie-a81]

Salut, @Océane1110

 

Pour en revenir à la question que tu posais, je me suis renseignée et en effet, il n'y a que la technique utilisant le Phenylisothiocianate (PITC) qui permet une conservation de la chaine peptidique après le clivage du 1er AA Nter et permet donc de réaliser un séquençage. Le DNFB et toutes les autres aminopeptidases dégradent cette chaine et ne permettent donc pas de réaliser un séquence du peptide.  

[Océane1110]

Merci beaucoup @marie-a81 de t’être renseignée! C’est pas ce que le professeur a dit par rapport à l’année dernière mais bon je pense pareil

Encore merci