ß mercapto éthanol intra chaîne

[CocheurMasqué]

Le ß mercapto éthanol coupe les liaisons disulfures inter-chaînes, ce qui est souvent utilisé dans les sujets de biomol au concours. Mais je me demande quelle activité a-t-il sur les liaisons disulfures intra-chaîne, sur lesquelles on ne voit pas les effets: si on ne voit aucune différence en Western blot (il me semble...) pour une protéine avec des liaisons intra-chaine, est-ce parce qu'il n'a aucun effet sur ces liaisons, ou bien c'est qu'il les clive, mais qu'on ne voit rien car elles ne séparent pas deux chaînes?

Bon je me perds un peu dans ma question, mais en gros quel effet a le ß mercapto éthanol sur les liaisons disulfures intra-chaînes?

[Cactus]

Salut, 

 

Oui le ß mercapto éthanol dénature les ponts disulfure.

Mr Perret fait des pièges dans les QCMs : 

En Western Blot s'il n'a aucun effet sur la protéine, ça veut dire qu'il n'y a pas de pont SS dans cette protéine 

Mais tu peux très bien avoir une protéine avec 2 chaînes de même PM avec un pont SS, du coup en WB les 2 chaînes seront quand même sur le même trait en présence de ß mercapto éthanol, tu suis ?? 

 

 

EDIT : Était peut être pas ça ta question 

[CocheurMasqué]

Hahaha non c'était pas la question j'ai du mal à la formuler, mais je parle vraiment des chaines disulfures intra-chaîne!

Mais merci ton rappel est simple et efficace!

[Dine]

Salut @CocheurMasqué , 

En gros le Béta mercapto-éthanol agit sur les deux, pont inter-chaine et intra-chaîne mais quand il agit sur un pont intra-chaîne tu n'auras pas deux bandes parce que les deux cystéines appartiennent a la même chaine justement, donc comme tu l'as dis y'a un effet mais il n'est pas " visible "

Edited October 1, 2018 by Dine

[Scorpio]

C'est utile dans ce genre de cas :

Dans le cas d'un peptide linéaire (cad pas de liaison inter-chaines)
 

1. On fait agir de la trypsine --> Rien ne se passe
2. On rajoute du B-Mercaptoéthanol --> 2 peptides se dégagent

 

Le peptide était du genre MPCAKHCPH

Enfant, la trypsine a bien coupé mais on ne l'a pas vu car les ponts di-sulfure intra-chaînes gardait le peptide "soudé".

Edited October 1, 2018 by Scorpio

[Dine]

D'ailleurs j'ai une question, y'a une distance maximale entre les cystéines pour l'établissement de ponts di sulfures ou non? 

[CocheurMasqué]

Merci bien!

 

Et je ne sais pas du tout pour les liaisons disulfures