Purification proteines de fusion (vecteurs)

[Yas]

Salut,

 

dans le cours de m.langin sur les vecteurs, je ne comprend pas une etape de la purification des proteines de fusion (page 9) : je ne vois pas à quoi sert l'etape d'elution au GSH qui detache le complexe proteine+ GSH des billes magnetiques ; pourquoi ne pas utiliser la TEV protease a ce moment là et se debarasser des billes de GSH directement ?

 

Merci!

[LinKuT]

Bonsoir,

ta question est pertinente. Selon moi, les conditions de la chromatographie d'affinité font que la protéase ne peut pas agir quand le mélange se trouve dans la colonne.

Quoi qu'il en soit, retient qu'il faut réaliser une élution avant de pouvoir couper avec la protéase