Généralités Bettina

[Téo]

Bonjour 

J'ai compris quelque chose avec les QCM mais avant d'en faire une généralité j'aimerais bien avoir une confirmation sure !

Il faut rajouter un gêne de résistance a un antibio quand on fait de la recombinaison homologue et pas quand on fait de la transgenèse additive ? Ou alors pourquoi dans ce QCM (item E) il faut pas le deuxième promoteur ? Si quelqu'un a les explications merci à lui !

[ISB]

Salut Téo !

Concernant ta question sur la nécessité d’implémenter un gène codant une résistance à un antibiotique, ma prise de note me pousse à te confirmer, voilà ce que j'en dis d'après ma prise de note :

 

1) En effet, dans le cadre d'une transgenèse additive, on implante un ovocyte fécondé dans l'utérus d'une souris pseudogestante qui aura des souriceaux transgéniques et d'autres non. Du coup, ici, pour détecter la présence ou non du transgène chez le souriceau, on peut réaliser une PCR sur un échantillon du souriceau (biopsie de l'organe où était sensé être exprimé le gène) puis un western blot.

 

En revanche, pour la transgenèse par recombinaison homologue, qui se fait sur des blastocyste cette fois ci, on injecte le gène à l'intérieur du blastocyste directement, mais ça ne fonctionne pas à chaque fois, car comme l'avait dit la Pr il s'agit d'une procédure très technique et minutieuse. Par conséquent, on réalise plusieurs transgenèses de l'ADNc d'intérêt + d'un gène codant pour la résistance à un antibiotique, sur plusieurs blastocyste que l'on cultive dans un milieu, dans lequel on va administrer cette antibiotique afin de sélectionner les blastocyste transgéniques. 

 

2) Pour ce qui est de l'item E : Il me semble qu'il est vrai. On te dit qu'il s'agit d'une transgenèse additive, or comme je l'ai dis précédemment, dans ce cas de figure pour vérifier la présence du transgène on fait PCR + Western, pas besoin de sélection via antibiotique. L'item aurait par contre été faux sur de la transgenèse par recombinaison homologue.

 

En espérant t'avoir aidé ! 

[Téo]

Salut  

C'est le résumé qu'il me fallait merci un max !