Clonage orienté/non-orienté

[kikilefada]

bonjour, je me rend compte que je n'ai rien compris à cette histoire de clonage orienté non orienté. Ex dans ce QCM en PJ, selon quels critères est ce que l'on va pouvoir déterminer s'il s'agit d'un clonage orienté ou non? merci beaucoup d'avance (si qqn pouvait me rééxpliquer en 3 lignes le principe  ...... MILLE MERCI) 

 

Bon lundi de pâques à vous ! 

KIKI

[Sahra]

Salut Kiki! 

 

En petite balade sur le forum, je me permets de répondre à ta question même si je viens de contrées voisines (mes confrères Maraîchers viendront compléter/rectifier au pire, bisous sur vous d'ailleurs). 

Tu as une partie de la fiche Formation Génome faite à Purpan  par la respo Comm (Coucou Etou ) qui traite de ça je te le mets ici : 

 

Du coup, selon si tu coupes avec des enzymes compatibles ou non, tu pourras déterminer l'orientation ou non de ton clonage (en gros est ce que ton fragment peut s'insérer dans l'autre sens = non orienté ou s'il s'insère toujours dans le même sens = orienté). 

 

Pour l'item A en question, l'utilisation de BamH1 (G/GATCC) et PstI (CTGCA/G) permettrait un clonage orienté puisque tes extrémités ne seraient pas compatibles : 

Tu vois bien ici que ça ne risque pas de s'emboîter donc les extrémité BamH1 (ADNc) - BamH1 (vecteur) et PstI (ADNc) - PstI (vecteur) se lient forcément ensemble, c'est orienté. 
 

Cependant ici, en coupant avec PstI, tu vas faire une coupure en plein milieu de l'ADNc puisque tu as un site de restriction PstI, et c'est pas top, si tu n'as pas ton ADNc en entier surtout sans son codon stop c'est pas très pratique... A voir avec la correction de ton item. 

 

Ca t'éclaire un peu? 

 

 

 

 

 

 

[kikilefada]

super, @Sahra! merci beaucoup, je vais faire un tour sur le tuto de purpan alors! 

[Sahra]

Avec plaisir!  

Oui viens donc faire un tour du côté de la force