Identification des ag des tumeurs Pr Ayyoub

[Canari]

Bonjour, en revoyant le cours du Pr Ayyoub, je n'arrive pas à comprendre pourquoi quand on cherche à identifier le gène codant pour la protéine du peptide antigénique de la cellule tumorale, les chercheurs passent pas la transformation de bactéries avec tout les plasmide de clonage gènes de la cellule tumorale... Pourquoi ne passerait on pas directement pas la transfection des cellules normales eucaryotes, on regarde là ou ya lyse et après on sequence ? A moins que ce soit parce que les cellules sont lysées qu'on ne peut pas sequencer le gène et que l'on repart dans la bactérie correspondante ?

 

Par ailleurs tant qu'on y est, on est bien d'accord pour dire qu'il n'y a pas expression du gène dans la bactérie car promoteur incompatible ? Juste pour me rassurer sur le cours du Pr Couderc..

 

Bon vendredi sans cours

Cordialement

 

Canari

[mariemma]

Bonjour, je vais d'abord confirmer la deuxième partie de ta question: ORI est une origine de réplication présente sur les vecteurs, elle est toujours procaryote. Elle permet de multiplier le nombre de vecteurs. Le promoteur lui peut être procaryote ou eucaryote dans le cours de Bettina, s'il est procaryote tu peux transcrire et traduire dans la bactérie si le promoteur est eucaryote tu vas transcrire et traduire (+/- modifications post traductionnelles) dans une cellule eucaryote.

 

Ainsi je pense que dans le cadre de la leçon du Pr Ayyoub, tu transformes les bactéries pour avoir un max de vecteur grâce à la réplication puis tu prend ton vecteur et tu transfectes une cellule eucaryote pour le reste ! Ai-je répondu à ta question ? Parce que je n'ai pas saisi le sens de "

 A moins que ce soit parce que les cellules sont lysées qu'on ne peut pas sequencer le gène et que l'on repart dans la bactérie correspondante ?" 

[azidkhawla]

Je pense que le passage par des bactéries c'est pour des problèmes pratiques en termes d'expérience, le passage par le stade bactéries ca permet de multiplier tes plasmides et donc meilleur rendement de l'expérience, de plus un plasmide c'est forcement d'origine bacterienne donc dans tout les cas au départ t'es bien obligé de passer par là ,  par contre dans mon cours de l'an dernier c'etait bien des cellules eucaryotes qui etait tranfectees , je sais pas si c'est le cas pour toi, j'ai peut être mal compris.

Par rapport à ta question sur les promoteurs, pour moi ce n'est pas parceque le gene venait d'une cellule eucaryotes qu'on pourra pas le faire exprimer par des bacteries, il suffira de mettre un promoteur procaryotes devant , mais je te conseille de demander a betina si c'est possible parcequ'en termes de modification post traductionnelles cest peut etre pas le cas ! 
Voila j'espère que ça t'auras aidé

[Canari]

Bon alors pour repondre à Marieemma :

En gros on ne peut pas multiplier le nombre de vecteur chez un eucaryote ? juste chez les procaryotes ? (ça eclaircirait de multiples points si c'est le cas :D)

En fait je me suis dit pour la question que tu ne comprends pas : vu qu'il faut sequencer le gene et que les cellules eucaryotes voulues sont lysées, ont ne peut pas recuperer l'ADN pour le sequencer ducoup on est obligé de repartir le sequencer chez les bacteries mais bon je pense plutot que c'est parce que on ne replique pas chez les eucaryotes et qu'on ne fait qu'exprimer la protéine... Merci pour ta réponse

 pour repondre à azidkhawla oui les cellules eucaryotes sont transfectées, les cellules normales avec les vecteurs provenant des bacteries des puits... Mais en fait j'ai tout compris

Un grand merci à vous deux bon week-end

Cordialy

Canari