Exercices de trangénèse

[lili226]

Bonjour j'aurais quelques questions concernant les cours de T.Levade sur la transgénèse

 

CC2016) QCM8) 

B. FAUX 

je ne comprends pas trop cet items, j'aurais tendance a le mettre vrai... Est-ce qu'on obtient pas des souris -/+ mais -/- dont les 2 allèles sont inactivés ? 

 

CC2015 QCM16

E.FAUX 

je n'arrive pas à répondre à cet item

 

De plus j'aurais une question concernant les cassettes de sélection NeoR et HSV-tk. Selon moi ces cassettes ont 2 fonctions possibles soit inactiver des gènes en les plaçant au milieu d'un exon soit permettre la sélection des cellules ES chez qui la recombinaison homologue se sera correctement effectuée comparativement aux cellules ayant effectuées la recombinaison aléatoire??

Cependant quand l'on veut inactiver un gène, est ce que le fait de placer une cassette (peu importe laquelle (NeoR ou tk)) dans un exon permet l'inactivation de ce gène ou est ce qu'il faut placer la cassette dans l'exon contenant l'ATG initateur ??

 

CC2017 QCM9

D. FAUX 

je mettrais cet item faux mais j'ai un doute sur les explications 

- pour moi, en rapport avec ce que je disais plus haut pour inactiver le gène il faudrait placer les cassette 1 ou 2 dans l'exon 1 contenant l'ATG initiateur, en gros l'item serait faut rien a voir avec l'explication donnée parce qu'utiliser les 2 cassette proposées (en plus elles ne sont pas citées dans le bon ordre) servirait uniquement à s'assurer qu'il y a bien eu recombinaison homologue mais je suis absolument pas sure de moi...

 

E. FAUX je ne comprends pas l'item

 

Voila désolé c'est un peu long!! Merci d'avance 

QUESTION RECHERCHE 2 word.docx

question recherche 3 word.docx

[lili226]

Je sais pas si j'ai étais assez claire sur ma question : en gros en plus simple

- placer une cassette dans un exon permet de l'altérer, de l'inactiver mais est ce que pour inactiver le gène il faut placer la cassette dans l'exon contenant l'ATG initiateur ?

 

Voila merciiii

 

[Shtomal]

Coucou !  

 

Alors : 

Pour le CC 2015 : 

On voit que sur l'insert, il y a les enzymes Apa et Nsil qui sont utilisables (a troisième est entre l'ATG et le stop). 

Du coup, en cherchant les sites présent sur le plasmide qui seraient compatible, on voit qu'il y a SfcI et PstI. 

 

Du coté rouge, on pourra couper par BsgI. 

Mais du coté bleu, ca ne fonctionne pas parce que quand on recolle les bouts coupés par Nsil  et PstI, on a un A au tout début à la place du G. 

Je te joint une photo  (Ne fais pas attention au sur lignage jaune, je m'étais trompée. Ce qu'il faut voir c'est le sur lignage orange). 

 

Pour le CC 2016 : je ne vois pas où est la photo ahaha oups ... 

 

Pour le CC 2017 : 

Voilà ce que j'ai fait : 

 

Dis moi si quelque chose n'est pas lisible ou autre  

Je n'ai pas pas trop suivi tes questions, mais je t'ai montré comment je raisonne... Si ça ne suffit pas, dis moi et j'essaierai de répondre plus spécifiquement aha  

N'hésites vraiment pas  

 

Et en espérant ne pas me tromper et t'avoir aidé !  

 

 

 

[lili226]

merci beaucoup pour tes réponses! je vais essayer de te mettre le CC2016

 

Mais il y a tjrs un truc qui me dérange, je pense ne pas avoir très bien compris une partie de cours

=> pour moi ce qu'on nous propose dans la D) CC2017 ne PERMET PAS d''inactiver les gènes, mais de SELECTIONNER les cellules chez qui la recombinaison homologue aura eu lieu... est ce que je me trompe ??

 

Après pour moi les cassettes servent aussi a inactiver des gènes et voila ma grande question : pour inactiver le gène suffit-il de placer la cassette au milieu de n'importe quel exon OU il faut placer la cassette dans l'exon contenant l'ATG initiateur ??

 

[JulienAyerbe]

Pour inactiver un gène, il suffit de placer la cassette au milieu de n'importe quel exon, PAS FORCÉMENT dans celui contenant l'ATG initiateur. Cette technique permet d'invalider ET de sélectionner les cellules chez qui la recombinaison homologue a eu lieu. Le fait d'avoir la cassette néo au milieu de l'exon d'un gène entraînera lors de la transcription puis traduction  la création d'une protéine tronquée donc non fonctionnelle (le gène sera donc considéré comme invalidé).

En espérant avoir répondu correctement à ta question, courage pour la suite !

[lili226]

super merci