Phosphatase alcaline

[Meredith]

Salut salut, 

 

petite question sur les conditions d'utilisation de la phosphatase alcaline dans le cours de levade sur les vecteurs, je ne comprends pas exactement quand est ce qu'on peut dire qu'il faut ou non l'utiliser pour empêcher que les vecteurs se referment, pour moi il faut l'utiliser tout le temps, cependant j'ai un doute, qqn pour m'éclairer svp?  

 

aussi je me demandais si il était possible que l'on coupe un vecteur en utilisant qu'un seul site de restriction ? cela me parait impossible mais dans la dernière colle du TAT , l'item à ce sujet est compté vrai .. 

Edited March 3, 2018 by Nanienanie974

[pj31]

il y a 14 minutes, Nanienanie974 a dit :

Salut salut, 

 

petite question sur les conditions d'utilisation de la phosphatase alcaline dans le cours de levade sur les vecteurs, je ne comprends pas exactement quand est ce qu'on peut dire qu'il faut ou non l'utiliser pour empêcher que les vecteurs se referment, pour moi il faut l'utiliser tout le temps, cependant j'ai un doute, qqn pour m'éclairer svp?  

 

aussi je me demandais si il était possible que l'on coupe un vecteur en utilisant qu'un seul site de restriction ? cela me parait impossible mais dans la dernière colle du TAT , l'item à ce sujet est compté vrai .. 

Salut à toi 

-Alors il faut utiliser la phosphatase alcaline toutes les fois ou tu coupes le vecteur avec une enzyme de restriction car sinon il y a des risques que les 2 bouts se recollent car ils sont forcément cohésifs. Après, quand tu coupes avec 2 enzymes de restrictions différentes il y a 2 cas possibles, soient elles aboutissent à 2 bouts qui sont cohésifs et alors là il faut utiliser la phosphatase, soit elles ne donnent pas 2 bouts cohésifs et là tu n'as pas besoins de l'utiliser car quoi qu'il arrive les 2 bouts ne pourront pas se recoller puisqu'ils ne sont pas adhésifs.

 

-Et bien sur que  si il est possible de couper un vecteur avec une seule enzyme. Pk penses-tu que ce n'est pas possible?

[Meredith]

Ah très bien j'ai compris merci! 

et je me suis mal exprimer ce que je voulais dire c'est que je pensais qu'il fallait 2 enzymes de restriction pour insérer une séquence  nucléotidique dans le vecteur , qu'une seule ne suffisait pas quoi 

Edited March 3, 2018 by Nanienanie974