Système de détection à double sélection

[jb31]

Bonjour, 

Je ne comprends pas le principe d'un système de détection à double sélection, et en particulier la sélection négative avec l'utilisation d'une sélection négative avec la TK d'un virus HSV. merciii de l'aide !!!!!!!!!!!!!!

[Capu]

Salut Jb 31! 

 

Lors de la transgènèse par recombinaison homologue, on cherche à détecter les cellules ayant intégré l'ADN à insérer à l'endroit voulu, c'est à dire pas au hasard. 

On utilise donc un système de détection à double sélection. 

 

La première sélection est positive : dans le morceau d'ADN à intégrer (=région homologue), on ajoute une "cassette" conférant une résistance aux antibiotiques. Ainsi, les cellules ayant effectivement fait la recombinaison homologue ne mourront pas en présence de l'antibiotique concerné (ex : néomycine).

 

Dans un deuxième temps, on réalise une sélection négative. En dehors des régions homologues, on insert une autre cassette contenant, ce coup ci, un gêne dit "suicide". Si on prend l'exemple de la TK de HSV,  il s'agit d'une enzyme qui rend le gancyclovir toxique. Ainsi, si on met du gancyclovir dans le milieu et que la cellule a inséré le transgène au hasard (par recombinaison non homologue), elle mourra par expression de la TK. 

 

On a donc bien une double sélection avec d'un coté un antibiotique (ex : néomycine) et de l'autre, le gancyclovir  Au final, tu obtiendras uniquement des cellules ayant réalisé correctement l'insertion du transgène, c'est à dire par recombinaison homologue. 

 

En espérant avoir été assez claire, 

N'hésite pas si tu as d'autres questions! 

 

Bonne soirée, 

 

Capu (Tutrice recherche)

[jb31]

Parfait !!!!!!!!