Saturation vs compétition à l'équilibre

[Murdoc]

Salut, j'ai une question à propos de l'IC50 et même en général sur l'expérience de compétition à l'équilibre.

 

Si j'ai bien compris, l'expérience de compétition à l'équilibre consiste à faire une série de mesures ou on met d'abord une quantité de ligand froid PUIS une quantité de ligand marqué ?

Puis on mesure et on recommence avec une quantité de ligand froid plus importante et une quantité de ligand marqué identique.

 

Et donc, deuxième question, la différence entre l'IC50 et le KD finalement, c'est que l'IC50 donne la concentration qui occupe 50% de la liaison spé + non spé (donc totale) tandis que le KD lui donne la liaison spé ?

 

Merci ^^

 

 

[estelleeeee]

Bonjour, 

Pour ta première question : oui c'est ça tu mets une quantité fixe de ligand marqué et tu testes ton ligand froid avec des quantités croissantes. 

 

Le Kd est la constante de dissociation, il est inversement proportionnel à l'affinité de la molécule pour sa cible. On le trouve par les expériences de saturation à l'équilibre et c'est une constante propre à la molécule.

 

 

(attention à 2Kd on n'attend pas 100% de saturation) 

 

L' IC 50 (concentration inhibitrice 50) = concentration de ligand froid qui est capable d’inhiber la moitié de la liaison du ligand radioactif. On la trouve dans les expériences de compétition à l'équilibre. Son utilisation est rare car  très variable : dépend de la molécule testée, du ligand radioactif utilisé comme référence, et la concentration du ligand radioactif, dépend du récepteur, du tissu, de la préparation tissulaire. C'est pour cela qu'on s'affranchit de ses paramètres en calculant le Ki (qui est est une constante) par l'équation de Cheng et Prussof. 

 

En espérant que ça soit plus clair pour toi  

 

[DrWho]

Yop MûreDoc

Pour moi l'expérience de compétition consisté à augmenter progressivement la concentration de ligands froids sans avoir à recommencer ni à modifiée la quantité de ligands radioactifs.

 

Et pour le reste je te dis sa dans quelques heures (foutus mise à jour)

Édit : Devancé

Edited February 18, 2018 by DrWho

[Murdoc]

Merci pour ta réponse @estelleeeee

 

Pour la première question, je sais que ce n'est pas très utile de s'y attacher, mais et ce que l'ordre que j'ai mentionné est bien le bon  ?

Et aussi :

il y a 38 minutes, estelleeeee a dit :

L' IC 50 (concentration inhibitrice 50) = concentration de ligand froid qui est capable d’inhiber la moitié de la liaison du ligand radioactif.

 

Je ne comprends pas pourquoi on parle d’inhibition en fait..

Ce que je  comprenais c'est qu'on mettait le ligand froid, il occupait un certain nombre de récepteurs et autres zones de liaisons non spécifique comme la membrane cellulaire, et que quand on mettait le ligand radioactif par la suite, celui ci avait moins d'espaces auxquels se lier.

Pour moi, l'IC50 était la concentration de ligand froid pour laquelle le ligand radioactif avait moitié moins d'endroits où se lier, en gros.

Mais comme on parle d'inhibition, et de déplacer la liaison, j'aimerais bien comprendre le mécanisme.. J'ai probablement compris de travers

 

En tout cas merci pour ta réponse détaillée

Edited February 18, 2018 by Murdoc

[estelleeeee]

Pour être honnête, l'ordre précis je ne le connais pas et ça n'est pas l'important.  

 

En fait pour l'IC on parle d'inhibition car le ligand froid empêche la liaison du ligand radioactif. Du coup plus tu augmentes la concentration de ligand froid, plus la radioactivité diminue car on déplace de plus en plus la liaison ligand radioactif-récepteur : ce qui donne une courbe sigmoïde. 

 

Est-ce plus clair?  

 

 

[Murdoc]

D'accord merci !

Donc l'IC concerne bien la liaison totale j'imagine