lili226 Posted February 12, 2018 Posted February 12, 2018 Bonjour j'ai un petit problème avec l'item B) du QCM16 CC2015 je ne comprends pas trop pourquoi cet item est vrai, pour moi les extrémités collent et la ligase pourra synthétiser une l° phosphodiester entre les 2 extrémités du vecteur sans que l'insert ne se soit incorporé. A part si on a utilisé la phosphatase alcaline qui enlève les P en 5' a ce moment ce n'est plus possible, mais dans l'énoncé il ne précise pas et il n'indique pas "dans les conditions idéales" donc...? pour l'item E) est-il faut car par forcément par ex si j'avais utilisé ApaLi pour couper le plasmide ça ne marche pas Merci d'avance!!! LEVADE VECTEUR pdf.pdf Quote
pj31 Posted February 12, 2018 Posted February 12, 2018 Salut lili 226 , Pour item B, Ici tu coupes avec 2 enzymes de restrictions qui sont non isoschizomères, elles ne coupent pas au même endroit, les extrémités coupées sur le plasmide ne seront pas cohésives après coupure par ces 2 enzymes ! Du coup pas besoin d'utiliser la phosphatase ! L'item est donc bien vrai. Pour l'item E tu ne peux pas couper le plasmide avec ApaLi car il ne figure pas sur le polylinker En espérant t'avoir éclairé Quote
lili226 Posted February 12, 2018 Author Posted February 12, 2018 dac pour l'item E) Par contre pour la B) je ne comprends toujours pas, je suis d'accord qu'elles ne sont pas isochizomères mais pour moi les bouts sont cohésifs, ils coïncident. En gros pour moi c'est la même chose que ce que l'on fait entre le vecteur et l'insert sauf qu'ici c'est entre les 2 bouts du vecteur! Et lorsque que on le fait vecteur/cDNA on est pas obligé d'avoir des isoschizomères, juste des bouts qui coïncident (comme ici pour moi) donc je ne comprends toujours pas.... Quote
pj31 Posted February 12, 2018 Posted February 12, 2018 il y a 4 minutes, lili226 a dit : dac pour l'item E) Par contre pour la B) je ne comprends toujours pas, je suis d'accord qu'elles ne sont pas isochizomères mais pour moi les bouts sont cohésifs, ils coïncident. En gros pour moi c'est la même chose que ce que l'on fait entre le vecteur et l'insert sauf qu'ici c'est entre les 2 bouts du vecteur! Et lorsque que on le fait vecteur/cDNA on est pas obligé d'avoir des isoschizomères, juste des bouts qui coïncident (comme ici pour moi) donc je ne comprends toujours pas.... Non ça ne coïncide pas, Pst 1 coupe avant le dernier G dans "CTGCAG" et Sfc 1 coupe après le premier C dans la même séquence, le trajet de coupure est en" espèce de miroir" entre les 2 enzymes, et si tu regarde bien on ne peut pas trouver de correspondance en mettant bien les extrémités 5' et 3' ensemble.... C'est dur à expliquer mais crois moi il faut toujours que les 2 enzymes coupent exactement au même endroit pour que les 2 bouts soient cohésifs, tu as raison les enzymes n'ont pas besoins d'être isoschizomères mais en tout cas le trajet de l'enzyme doit être le même et en plus les 4 nucléotides du milieu doivent tjrs être exactement pareil (même ordre et même nucléotides) entre les 2 sites d'action des enzymes Essaye de t'écrire les sites d'actions et de faire le trajet de coupe des enzymes en faisant figurer le brin complémentaire aussi et tu visualisera mieux je pense... J'espère que t'as compris malgré mon explication foireuse ^^ Quote
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