QCMs 18 et 19 p51 ED

[Zoee]

Bonjour!

 

je comprend pas grand chose à l'histoire de NeoR etc, donc j'ai pas compris comment résoudre ces qcm:

 

QCM 19 ( réponses justes: BCD )

https://image.noelshack.com/fichiers/2018/01/3/1515008408-img-3299.jpg

 

QCM 18 ( réponses justes BDE )

https://image.noelshack.com/fichiers/2018/01/3/1515008411-img-3297.jpg

 

 

Merci pour votre aide!

[Sahra]

Salut Zoee! 

 

QCM 19

 

Alors pour ce qcm, on cherche à inactiver un gène (ici du récepteur CB1), et on le fait par recombinaison homologue. On va échanger un morceau d'un exon codant pour ce gène par le gène de résistance à la Néomycine.
On aurait pu mettre autre chose, mais l'avantage de mettre un gène de résistance c'est la sélection qu'on va pouvoir faire par la suite pour vérifier que notre "construction" contenant l'inactivation et donc ce gène NeoR, s'est inséré dans le génome cible. De plus, sur notre construction, comme tu l'as vu en cours il y a aussi le TK, qui lui est nocif en présence de ganciclovir. Il permet de tuer les cellules qui ont certes intégré la construction mais qu'ils l'ont fait aléatoirement (il n'y a pas eu de recombinaison avec l'exon, si ça avait été le cas, le TK aurait été excisé).

NéoR : sélection positive (si la cellule l'a, c'est bien, elle a intégré la construction, elle résiste au G418, on la garde). 
TK: sélection négative (si la cellule l'a, c'est que la construction est mal intégré dans le génome, elle meurt en présence de ganciclovir). 

 

Item A. Faux. C'est schématique, les rectangles sont des exons, et le trait plus fin représente les introns. Tu vois qu'il n'y a qu'un rectangle hachuré continu pour l'allèle sauvage, donc tu n'as qu'un exon codant pour ce gène du récepteur à la CB1. 

 

Item B. Vrai. On te dit dans l'énoncé que ton allèle modifié et intégré, est sous le contrôle du promoteur du gène de la phosphoglycérate kinase. Ce promoteur ce n'est pas toi qui l'a rajouté (tu ne le vois pas sur ta construction), il est donc naturellement dans le génome. Donc si tu as le promoteur de ce gène, et que tu ne l'as pas touché, il doit y avoir le gène correspond qui s'exprimera naturellement et donc à posteriori l'enzyme s'exprime sans soucis. 

 

Item C. Vrai. Elles sont résistantes au G418 (analogue de la Néomycine) puisqu'elles ont le gène de résistance NéoR. Et elles sont résistantes au ganciclovir, car le TK a été excisé (signe d'une recombinaison, c'est ce qu'on veut). 

Item D. Vrai. L'insertion de la totalité, donc en présence du TK, insinue qu'il n'y a pas eu de recombinaison et que l'insertion a été aléatoire. Du coup, elle a pu se faire un peu n'importe où dans le génome, et même au sein d'autres gènes endogènes qui n'ont rien demandé, ce qui te modifie leur activité. 

Item E. Faux. Ici il faut faire la distinction entre la micro-injection faite dans l'oeuf fécondé (-->Transgénèse additive) et dans un blastocyste (--> transgénèse de recombinaison). 

 

QCM 18

Item  A.B. Tu vois que pour (a), on a une amplification avec 1-2 mais pas 3-4. Les amorces 3-4 étant sur le NéoR, il n'est pas présent. Tu as donc 2 allèles sauvages (non inactivés). Ta souris est +/+.
Item A. Faux
Item B. Vrai

Item C.D. Ici tu as une amplification avec les amorces 3-4 et non 1-2. Tu es donc en présence de NéoR. Ta souris a donc ses deux allèles inactivés, elle est -/-. Si elle avait était hétérozygote (un allèle sauvage +, un allèle inactivé -) elle aurait eu une amplification avec 1-2 et avec 3-4.
"Pourquoi elle n'a pas d'amplification avec 1-2 pour l'allèle inactivé, alors que sur le schéma on voit bien les amorces?" Très bonne question!
(Oui, oui, je sais lire dans les pensées Pacessiennes    )
Ce qu'il faut bien voir ici, c'est qu'on amplifie des ARNm (on fait des RT-PCR). Si on avait fait des PCR (donc sur l'ADN) on aurait eu une amplification avec 1-2. Mais ici, la transcription s'arrête après le gène NéoR, donc toute la séquence génétique qui suit n'est pas présente dans l'ARNm, ne peut pas être amplifiée par la RT-PCR, puisque les amorces 1-2, peuchères, ne reconnaissent plus rien. 

Item C. Faux
Item D. Vrai

 

Item E. Vrai. Effectivement, chez les souris inactivées (homozygotes), le gène NéoR est bien transcrit puisque tu as une amplification avec les oligodesoxynucléotides 3-4. 
 

Et v'là! Si y'a quelconque soucis n'hésite pas   

Force et courage! 

[Zoee]

Merci beaucouuuuup d'avoir pris le temps de répondre à tout et c'est super clair et agréable à lire , j'ai tout compris