La_Reine_Rouge Posted November 7, 2017 Posted November 7, 2017 Bonjour, Je n'arrive pas à montrer qu'une structure en SDS Page est un monomere, un tetramere, dimere, homo/hetero etc alors qu'il me semble bien connaître la définition de chacun des termes. Par exemple, sur le fichier ci joint, on a une bande à 11.4 kDa et une à 34.2 kDa pour un total à environ (et inférieur à) 60 kDa. Pourriez vous me faire une démonstration pour les items A et B ? Merci d'avance !
Solution ArnaudBouix Posted November 7, 2017 Solution Posted November 7, 2017 Bonjour, Pour l'item A : Sur la chromato en SDS on voit que les monomères mesurent un peu moins de 6 kDa. Or les molécules apparentes sont de 11,4 kDa et 34,2 kDa, elles correspondent à de l'insuline purifiée donc on retrouve l'insuline sous 2 formes. On peut donc en déduire que l'insuline existe sous forme de dimères ( 2x 5,7 = 11,4 kDa ) ou d'héxamères ( 6 x 5,7 = 34,2 kDa). Attention , on sépare les monomères par SDS car ils sont faiblement liés , si on coupe au bêta-mercaptoéthanol on sépare des chaînes liées par des ponts dissulfures et non pas des monomères ( piège courant ) . Un hétérodimère sera un dimère composé de 2 monomère différents. Pour l'item B : Les deux chaînes séparées par le bêta-ME font environ 2,5 kDa et 3,5 kDa , on peut donc en déduire qu'un monomère est constitué de ces deux chaînes différentes puisqu'il pèse 6 kDa. Bonne journée !
SBW Posted November 7, 2017 Posted November 7, 2017 Même si ce n'était pas moi qui est posé la question merci !
La_Reine_Rouge Posted November 7, 2017 Author Posted November 7, 2017 Bonjour, Pour l'item A : Sur la chromato en SDS on voit que les monomères mesurent un peu moins de 6 kDa. Or les molécules apparentes sont de 11,4 kDa et 34,2 kDa, elles correspondent à de l'insuline purifiée donc on retrouve l'insuline sous 2 formes. On peut donc en déduire que l'insuline existe sous forme de dimères ( 2x 5,7 = 11,4 kDa ) ou d'héxamères ( 6 x 5,7 = 34,2 kDa). Attention , on sépare les monomères par SDS car ils sont faiblement liés , si on coupe au bêta-mercaptoéthanol on sépare des chaînes liées par des ponts dissulfures et non pas des monomères ( piège courant ) . Un hétérodimère sera un dimère composé de 2 monomère différents. Pour l'item B : Les deux chaînes séparées par le bêta-ME font environ 2,5 kDa et 3,5 kDa , on peut donc en déduire qu'un monomère est constitué de ces deux chaînes différentes puisqu'il pèse 6 kDa. Bonne journée ! Merci de ta réponse ! J'en profite pour te demander des explications sur la correction d'un des RM sur le qcm 34 de la colle d'hier : '' Item B: Après utilisation du β mercaptoéthanol, on obtient 2 tâches de masse différentes : alpha = 10 kDa et beta = 34 kDa. Mais on remarque que l'addition des chaines alpha+ beta = 44kDa. On a donc deux fois chaque chaîne pour retrouver le poids initial (88kDa). La pacesoglobine est donc un monomère et elle est aussi tétracaténaire (2 chaines alpha + 2 chaines beta). '' Pourquoi on ne peut pas parler d'hetero dimere ? Composé donc du 1er monomere dicatenaire alpha alpha et du 2eme monomere dicatenaire beta beta ? Pourquoi forcément un monomere ? (Je me pense que ma question est un peu bete mais je sais bloque sur ca je sais pas pourquoi!)
HadjDh Posted November 7, 2017 Posted November 7, 2017 Salut Chopin Parceque tu vois que sans B-ME et avec SDS on obtient une bande de 88kDa ce qui veut dire qu'on a qu'un seul monomère. Si tu en avais eu deux tu aurais eu 2 monomères etc... Avec B-ME tu vas dissocier les s.u du monomère, donc on voit qu'on a 4 s.u (2 s.u alpha et 2 s.u beta) Ainsi tu as un monomère constitué de 4s.u identique 2 à 2 Ca revient à ce que dit Arnaud : Attention , on sépare les monomères par SDS car ils sont faiblement liés , si on coupe au bêta-mercaptoéthanol on sépare des chaînes liées par des ponts dissulfures et non pas des monomères ( piège courant )
ArnaudBouix Posted November 7, 2017 Posted November 7, 2017 C'est parce que avec le bêta-mercapto on sépare des chaînes liées par pont dissulfure qui elles même constituent un monomère quand elles sont liées entre elles. Par contre si tu as un hétérodimère que tu traites au SDS PAGE tu obtiendras 2 monomères différents.
La_Reine_Rouge Posted November 7, 2017 Author Posted November 7, 2017 C'est parce que avec le bêta-mercapto on sépare des chaînes liées par pont dissulfure qui elles même constituent un monomère quand elles sont liées entre elles. Par contre si tu as un hétérodimère que tu traites au SDS PAGE tu obtiendras 2 monomères différents. Ah d'accord ! Donc en fait pour trouver si on a un monomere, un homo/hetero di mere (puis tri mere, tetra mere etc), on regarde la colonne SDS SANS Beta mercapto ethanol. 1 barre => monomere 2 barres => dimere (donc = 2 monomeres) et ainsi de suite Puis pour trouver le nombre de chaine (dicatenaire, tetra catenaire etc), on regarde la colonne SDS AVEC Beta mercapta ethanol. J'ai bien compris ? Merci !
Jeanneholmre Posted November 9, 2017 Posted November 9, 2017 Je viens rajouter mon petit grain de sel.. Mais je ne suis pas d’accord car en cours monsieur Perret avait bien dit que une seule bande ne signifiait pas qu il y avait un seul monomère (en page sds)! En effet il peut y avoir 2-3-4 monomères identiques et qui du coup ne forment qu’une bande (bien sûr il faut le déduire avec la colonne de droite pour pouvoir si le poids d’une seule bande correspond au pas aux différentes chaînes ou à qu’une seule chaîne justement )! Donc d coup le fait de dire une bande =un monomère est pour moi pas totalement vrai! Voilà voilà
Recommended Posts