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annales RTK


Go to solution Solved by Vlivli,

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Bonsoir  ^_^, j'ai plusieurs (voire beaucoup, comme d'hab) questions sur des annales par rapport aux recepteurs tyr kinase! si vous pouviez m'éclairer sur au moins certaines ..

 

- (purpan) 2012 : qcm 7, items D et E, j'aurai mis les 2 vraies du coup je comprends pas trop  :huh:

 

- 2013 : qcm 12, item E : comment on peut savoir ? parce que, la fin de la phrase laisse planer des doutes ^^, avec la molécule 1 on n'a pas de tâche sur le WB PLC gamma, d'ailleurs je n'ai pas compris la différence entre la figure 1A et 1B :wacko:

 

 

Voilaaaaaa merci !!!!

 

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salut !

 pour le qcm 7 : je pense que la d est fausse car au bout de 2 heures le ligand (EGF) s'est lié à son récepteur et a entraîné son internalisation. Donc tu as beau mettre de l'EGF il ne se fixera pas car tous les récepteurs seront rentrés dans ta cellule. Tu vois ce phénomène à travers la figure 2 , quand tu ne mets pas d'EGF, tes ac anti-récepteur EGF détectent l'EGF-R mais dès que tu rajoutes l'EGF, celui ci se fixe sur son récepteur et entraîne son internalisation; donc les ac anti EGF-R ne détectent plus le récepteur.

Pour la E, elle est vraie car on a muté le récepteur : l'EGF peut toujours se fixer sur son récepteur mais il ne pourra plus provoquer la dimérisation et donc l'internalisation. Donc au bout de 2h, l'EGF sera toujours fixé sur son récepteur à la membrane des cellules.

 

J'espère que c'est un peu plus clair :)

  • Solution
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Coucou ! 

 

Pour la différence entre la figure 1A et 1B, c'est qu'on immunoprécipite avec l'EGF-R pour la figure 1A et on révèle en WB ce qui peut lui être associé en fonction des différents anticorps utilisés en WB. Pour la figure 1B, on immunoprécipite la PLC gamma et on révèle en WB ce qui peut lui être associée.

L'immunoprécipitation sert à "prélever" dans ta cellule la molécule que tu veux étudier. Seulement cette molécule peut être liée à d'autres molécules que tu vas aussi récupérer comme elles sont liées à ta molécule d'intérêt. Le western blot sert à identifier les molécules inconnues que tu as immunoprécipitées avec la molécule d'intérêt.

 

Donc pour le QCM 12 item E, on constate que la molécule 1 n'empêche pas la phosphorylation sur Tyrosine de l'EGF-R (tu le constates sur la figure 1A, on a bien une bande au niveau de l'EGF-R quand tu fais ton Western Blot en utilisant un anti-corps anti-Tyrosine phosphorylée). Or quand tu fais un western blot en utilisant un anticorps anti-PLC gamma, au niveau de la colonne correspondant à la molécule 1, tu constates qu'il n'y a pas la bande correspondant à la PLC gamma qui apparait pourtant dans la colonne contrôle. En présence de la molécule 1, il n'y a donc plus de liaison avec l'EGF-R qui est phosphorylé.

 

Pourtant la PLC gamma est bien dans la cellule puisque la figure B le montre, quand tu fais une immunoprécipitation de PLC en présence de la molécule 1, et que tu utilises en WB un anticorps anti-PLC, la bande pour la PLC apparaît. Mais elle n'est pas liée au récepteur (on ne trouve pas de bande pour l'EGF-R quand tu utilises un anticorps anti EGF-R après immunoprécipitation de PLC)

 

Donc il est possible que la molécule 1 se lie sur la tyrosine phosphorylée de l'EGF-R, qui était le lieu normal de liaison de la PLC pour transduire le signal.

 

J'espère t'avoir aidé!!

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Merci beaucoup pour vos 2 réponses j'ai bien compris!

 

enfaite Vlivli, les techniques n'étaient pas très très claires dans ma tête (notamment l'IP), du coup je comprends mieux!

 

mais ya juste un tout petit détail : en immuno précipitant la PLC, forcément on fait tomber le EGF-R, par contre l'inverse n'est pas forcément vrai non? du coup, faire l'IP qu'avec la PLC aurait été suffisant non ?

 

et pour faire tomber la PLC par exemple, il faudrait ajouter de l'EGF avant l'IP pour activer le récepteur non (comme vu avec Perret) ? là c'est juste des questions techniques mais je pense que ça pourrait m'être utile ^^

 

en tous cas merci!

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