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Rangueuil 2014 qcm 3


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Bonsoir

 

Je ne parviens pas trop à comprendre l'item É du qcm 3 2014 de rangueuil (sur le polys d'immuni de l'année dernière il y a marqué purpan mais je pense que c'est une erreur)

 

Merci d'avance !

Posted

Si je me trompe pas de qcm, l'item E est vrai.

 

En effet, on peut déterminer quelle protéine est reconnue par AC2 par une chromatographie d'affinité. Si tu regardes ton cours, la chromatgraphie d'affinité, c'est quand on met les anticorps sur des billes de sépharose par exemple, puis on met les protéines dans le tube = seule la protéine reconnue par notre anticorps sera retenue. Puis on va augmenter la force ionique pour que les protéines se décrochent -> on aura donc isoler la protéine.

 

Ensuite, on peut l'identifier en immunoempreinte avec l'antisérum (on pourra connaitre sa taille..)

 

J'espère que j'ai été claire. :)

Posted

ce que je comprends pas c'est que c'est en condition dénaturante , donc pourquoi maintenant j'aurais quelque chose qui apparaît ? :/

  • Solution
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Salut !  :D

 

Alors si c'est les conditions dénaturantes qui te troublent, laisse moi te faire un topo sur les 3 méthodes utilisées ici : 

 

 

Chromatographie d'affinité : comme l'a dit Lisa, tu fais passer l'extrait protéique à dans un tube rempli de billes auxquelles sont accrochés des Ac-2, du coup, la protéine qui se lie à l'Ac-2 reste bloquée : cela permet d'isoler la protéine qui se lie à l'Ac-2

 

   -> Cette chromatographie se réalise en conditions non dénaturantes, car on veut que la protéine soit dans sa conformation normale, pour qu'elle puisse se lier à l'Ac-2 même si c'est un épitope conformationnel (de toutes manières, il n'y a aucun intérêt à la dénaturer)

 

 

PAGE-SDS : cette fois tu prends la protéine précédemment isolée, et tu la fais passer à travers des mailles (gel de polyacrylamide) pour séparer les protéines en fonction de leur taille : cela permet de déterminer la taille de cette protéine.

 

   -> Cette électrophorèse se réalise en conditions dénaturantes, car on veut que la protéine soit complètement dépliée afin qu'on puisse déterminer sa taille exacte.

 

 

Immuno-empreinte : c'est juste qu'on met des anticorps couplés à un truc pour les détecter (je sais plus si c'est un fluorochrome ou un truc du genre) sur le gel de l'électrophorèse, ainsi, en fonction de l'anticorps qu'on met (AS, Ac-1 et Ac-2) on pourra détecter directement la protéine ciblée par les anticorps

 

   -> ici, parler de dénaturation n'a pas de sens, puisque les protéines sont déjà dénaturées par le PAGES-SDS

 

 

 

Bref voilà j'espère que c'est plus clair dans ta tête, l'item dit qu'on réalise une chromatographie d'affinité en conditions non dénaturantes (comme toutes les chromatographies d'affinité) et l'énoncé affirme que le wester blot est en conditions dénaturantes (raccourci pour dire que le western blot est réalisé à la suite d'une PAGE-SDS en conditions dénaturantes, mais une PAGE-SDS est forcément dénaturante donc c'est logique)  -> il n'y a pas de contradiction :P

 

Voilà, j'espère que j'ai répondu à ta question ! Bonne soirée !  :D

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D'accord je m'étais tout mélangé je pensais qu'au vu des schémas , notre Ac reconnaissait un épitope confirmationel détruit par SDS ahah

Merci beaucoup pour vos reponses :)

Guest
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