Souris transgéniques

[Shtomal]

Salut ! 

 

J'ai un problème avec les souris transgéniques. 

Par exemple, pour l'item B, vrai, je ne comprends pas pourquoi avec une simple recombinaison homologue, on peut rendre homozygote une souris pour le général étudié. 

Pour moi, si on avait voulu rendre homozygote cette souris, il aurait fallu fait 2 recombinaisons homologues (chose très rare) sur les deux chromosomes homologues qui comportent ce gène.

Donc, du coup, je ne comprends pas la correction

 

 

Et une autre question : est ce que quand on dit "surexprimant", ça veut dire qui exprime plus que la normal pour l'endroit ou on a injecté le CDNa, ou bien, est ce que ça veut dire "qui exprime plus qu'à n'importe quel endroit du corps" ? 

 

Merci

[HadjDh]

Salut Lucile , 

 

Alors en Td on avait fait des QCM si tu t'en rappel qui disait que si lors d'une recombinaison homologue tu n'obtenais pas d'Homozygotes c'est peut être que les modifications étaient létales ou qu'elles perturbaient d'autres phénomènes. 

 

Je ne s'aurais te répondre parce que je ne me suis jamais posé la question mais on peut supposer par ces QCM que les recombinaisons sont censés être homozygotes.

 

De plus si tu vois que tu n'as pas obtenus d'homozygotes tu peux faire une mutagenèse conditionnelle pour dire où et quand tu veut exprimer ton insert. 

 

Pour la 2ème question ça veut dire qu'il n'est pas récessif, soit que c'est un gène qui est exprimé de façon constante quelques soient les conditions expérimentales et si je ne m'abuse son expression est à un taux très élevée .

[Shtomal]

Merci pour ta réponse mais je pense que je me suis mal exprimée... 

 

Mon problème est que : quand on prend un pronucléus mal et qu'on y intègre un transgène par recombinaison homologue, le transgène va s'intégrer sur le chromosome père.

Or, dans la suite du développement embryonnaire, les chromosomes mères vont entrer en jeu. Et je ne comprends pas pourquoi avec une seule recombinaison homologue, on peut faire un individu homozygote pour le transgène, alors qu'on ne l'intéresse que sur un seul des deux chromosomes de la paire.

 

Bon après, je suis pas hyper sereine sur la méthode de transgénèse par recombinaison homologue ... 

 

Mais merci quand même  

[MSagno]

Bonjour!

 

Alors, pour essayer de répondre à ta question, je te dirais que la mutagénèse dirigée se déroule ainsi :

 

- d'abord tu récupères des cellules ES d'une souris A, issues de la masse interne d'un blastocyste

- puis tu les mets en culture et tu les modifies grâce à la recombinaison homologue: tu obtiens ainsi des cellules ES génétiquement modifiées

- tu réinjectes ces cellules ES modifiées dans un blastocyste issu d'une souche différente et tu réimplantes ce blastocyste dans une souris porteuse B

 

Ainsi, à la première génération tu obtiens des souris chimères qui possèdent des cellules exprimant le transgène et des cellules exprimant le gène correspondant à celui de la souche B (qui ne possèdent pas le transgène).

 

Quand tu croises ces chimères avec des souris issues de la souche B, tu obtiens à la seconde génération des souris hétérozygotes transgéniques, ainsi que des souris non transgéniques ( qui ne possèdent pas le transgène).

Tu peux ensuite croiser les souris transgéniques hétérozygotes entre elles pour obtenir à la génération suivante des souris homozygotes et des souris hétérozygotes pour ton transgène.

 

Voilà, j'espère avoir répondu à ta question .

 

Bon courage

[Shtomal]

Ah super merci pour le rappel ! 

 

Et une dernière petite question :

 

Quand, par exemple, dans l'item A, on parle d'obtenir des souris homozygotes (ici -/- pour le Tg), est ce qu'on insinue qu'on l'obtient directement après transgenèse ? Ou bien, est ce qu'on peut considérer qu'après tous les croisements que l'on peut faire avec nos souris transgéniques, on doit pouvoir obtenir des souris homozygotes ? 

 

 

Merci encore pour ta réponse  

[MSagno]

En effet, l'item A tel qu'il est formulé indique implicitement que des souris homozygotes transgéniques ont été obtenues directement après transgénèse.

Or, comme tu l'as dit tout à l'heure, les chromosomes maternels sont aussi à prendre en compte dans le développement embryonnaire. Du coup, après transgénèse, la première génération de souris transgéniques sera hétérozygote. Et après croisement de ces souris entre elles, on obtiendra des souris homozygotes et hétérozygotes transgéniques.

 

J'espère avoir répondu à ta question

 

PS: je précise juste pour l'item A qu'il s'agit d'une technique de transgénèse classique et que l'intégration du transgène se fait de manière aléatoire.

[Shtomal]

Ah oui super !

 

Merci beaucoup !