Immuno

[alexandrejrl]

Salut, j'ai un peu de mal avec 2 techniques qu'on a vu en cours, en ce qui concerne :

- l' électrophorèse bidimensionnelle

- la cytométrie en flux

 

Si quelqu'un aurait le gentillesse de m'expliquer un peu en quoi ça consiste et dans quelles situations on peut les utiliser ça serait sympa!

 

Merci merci

[Dr-SuiuS]

Salut !

 

L'électrophorèse bi-dimensionnnelle :

 

Tu connais l'électrophorèse de base, celle qu'on te rabâche depuis le premier semestre : le principe est simple : on applique un champ qui va faire migrer les protéines, plus la protéine est grosse, moins elle va migrer loin.

 

Cette technique est super utilisée dès qu'on veut tout simplement détecter une protéine : on connaît son poids, donc si on trouve une bande correspondant c'est que la protéine est là. C'est aussi utile tout simplement pour étudier une protéine, trouver son poids moléculaire en condition dénaturantes ou non dénaturantes, trouver si elle contient des ponts di-sulfures, la mettre en présence de protéases qui vont la cliver ... Bref tout ce que tu as vu au premier quad 

 

... Hé ben l'électrophorèse bi-dimensionnelle c'est juste une électrophorèse améliorée   .

 

Dans l'organisme, on a pas un poids moléculaire différent pour chaque protéine, on peut facilement avoir deux protéines qui font le même poids ...

 

Dans ce cas-là, ces protéines ne seront pas différentiables sur une électrophorèse lambda, on aura juste une bande regroupant les deux protéines 

 

Du coup on fait une bi-dimensionnelle, avec deux migrations : 

 

Migration verticale, en fonction du poids moléculaire

   -> plus une molécule est légère, plus elle va migrer loin vers le bas

 

Migration horizontale, en fonction du pHi

   -> plus une molécule est chargée, plus elle va migrer loin vers la gauche (ou la droite, ça dépend de comment on a orienté le champ)

 

Voilà, après c'est exactement les mêmes utilisations que l'électrophorèse de base, elle est juste mieux, mais plus chère 

 

 

La cytométrie en flux :

 

Principe de base :

Tu prends un bocal rempli d'eau avec des cellules dedans, et tu veux compter le nombre de ces cellules (je caricature hein  )

 

Du coup tu fais passer cette eau dans un tuyau très fin, qui ne laisse passer les cellule que une par une.

 

Tu as un laser pointé sur ce tuyau, dès qu'une cellule va passer devant elle va dévier ce laser.

 

Une machine détecte cette variation, et du coup elle va comprendre qu'une cellule est passée

   -> Ainsi, on peut compter les cellules.

 

Améliorations possibles : 

1. Tu peux mettre des anticorps couplés à un fluorochrome sur certaines de ces cellules (cancéreuses par exemple), ainsi quand la cellule va passer devant le laser, elle va émettre des photons d'une couleur particulière, et comprendre que c'est une cellule cancéreuse : cela permet de détecter un certain type cellulaire marqué par des anticorps
2. Tu peux diviser le tuyau en deux, avec une petite vanne qui ouvre l'un ou l'autre des embranchements, ainsi, si la machine détecte  (grâce à la technique précédente) que c'est un certain type cellulaire, elle va ouvrir l'embranchement de droite, sinon, l'embranchement de gauche : cela permet d'isoler un certain type cellulaire
3. Tu peux améliorer la machine pour qu'elle analyse la déviation du laser afin de déduire la forme de la cellule, et donc, grâce à un algorithme assez compliqué, de déduire le type cellulaire (comme la numéro 1, la différence étant que l'algorithme est très long à créer, mais une fois qu'il existe cette technique est plus rentable que la première : elle n'est donc utilisée que pour les tests de routine). 
4. Et tu peux, bien sûr, combiner toutes les techniques précédentes pour séparer les différenctes catégories cellulaires de ta ponction (utilisé par exemple pour compter et isoler les hématies, PNN, PNB, PNE, lymphocytes, plaquettes... d'une prise de sang)

 

Utilisations en pratique : 

Il y en a plein, isoler des cellules tumorales d'une prise de sang, la numération formule sanguine (NFS, que tu as vu au premier quad), séparation des cellules hématopoïétiques...

C'est autant utilisable en pratique clinique qu'en recherche

 

 

Voilà, j'espère que c'est clair, bonnes révisions ! 

[alexandrejrl]

Merci beaucoup pour toutes ces explications, c'est très clair!!