BOULETL Posted April 3, 2017 Posted April 3, 2017 Salut J'étais en train de corriger mon CCB, et j'ai un soucis pour l'item C du QCM 3. "Si l'on a pratiquer la restriction d'un plasmide et d'un gène d’intérêt par deux enzymes X et Y dites à bout collant, alors il suffit de mettre les produits de restrictions en présence en présence d'un ligase pour obtenir un produit de ligation", compté faux. J'était d'accord jusqu'à tomber sur la diapo du cours sur les isocaudomères (enzymes qui reconnaissent sensiblement les mêmes séquences et dont les fragments ont des extrémités compatibles), ne peut-on pas les utiliser dans ce cas précis et rendre alors l'item vrai ? Merci d'avance ^^
Fiona Posted April 3, 2017 Posted April 3, 2017 Salut, je ne comprends pas non plus pourquoi cet item est faux, sachant que dans une diapo sur "petite aide sur le clonage", il est écrit : "Le clonage est orienté si le vecteur et l’insert sont coupés par deux enzymes différents à bouts collants : un seul sens d’insertion possible." Ce qui revient à faire ce qui est dit dans l'item non? Merci d'avance
bartlau Posted April 3, 2017 Posted April 3, 2017 Salut, Alors selon moi cet item est bien faux: pour pouvoir directement utiliser une ligase il faut des "bout-franc", du coup il faut d'abord utiliser des enzymes de modification (endonucléases ou exonucléases) pour transformer les "bout-collant" en "bout-franc". C'est pas contradictoire avec la phrase Fiona: elle a juste pas mentionné l'étape d'enzymes de modification, mais en effet pour un clonage orienté il faut deux enzymes différentes sinon les extrémité sont identiques et ont peut mettre l'insert dans un sens ou dans l'autre. Je pense que dans le concours blanc, la phrase est fausse a cause du "il suffit", pour bien montrer que non il faut aussi l'utilisation d'enzymes de modifications. J'espère que j'ai été clair
BOULETL Posted April 3, 2017 Author Posted April 3, 2017 Mais quelle est donc l'étape avant la ligase du coup, si les extrémités sont compatibles, il est inutile d'utiliser exonucléases ou polymérase non ? ^^
Fiona Posted April 3, 2017 Posted April 3, 2017 Mais il me semblait que la ligase pouvait intervenir que ce soit des bouts francs ou collants: le temps que dans le cas des bouts collants ce soit complémentaire (comme dans la photo) Et du coup dans l'exemple du cours, elle utilise bien deux enzymes différentes, et elle a mit juste l'action de la ligase donc là aussi il faudrait ajouter l'action des enzymes de modifications? j'arrive pas à voir, comment avec des bouts francs (donc par exemple, après passage d'une enzyme de modification sur un brin avec des bouts collants) il peut y avoir un clonage orienté.. J’espère je me mélange pas trop les pinceaux
Fiona Posted April 4, 2017 Posted April 4, 2017 En y réfléchissant de plus près, peut être que l'item voulait dire : -on coupe le plasmide avec l'enzyme X à bout collant -on coupe l'insert avec l'enzyme Y à bout collant et du coup à ce moment là il faut des enzymes de modifications, car les extrémités ne sont pas compatibles, avant l'action de la ligase.. alors que dans l'exemple de la prof, le plasmide ET l'insert sont coupés par l'enzyme X et Y, toutes deux à bout collant, et du coup l'action de la ligase peut se faire directement? (du moment que la ligase peut agir sur des bouts collants) Je sais pas si mon raisonnement est juste..
Solution LucilePenouilh Posted April 19, 2017 Solution Posted April 19, 2017 Salut à tous, En lisant l'item j'ai compris que l'une était utilisée pour le gène et l'autre pour le plasmide et non les deux sur chacun. Dans ce cas l'item est bien faux car il faut intervention d'une exonucléase et d'une polymérase pour que les extrémités soient compatibles. Fiona pour répondre à ta question, dans l'exemple du cours si les deux enzymes interviennent sur les deux et que les extrémités à bout collant sont alors compatibles, il n'y a besoin que de la ligase. En espérant vous avoir aidés
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