Fiona Posted March 9, 2017 Posted March 9, 2017 Salut, je suis pas sûre d'avoir compris une expérience, si quelqu'un pouvait m'éclairer en attendant le TD ? Je pose le contexte : en pleine découverte de l'interférence à l'ARN, nouvelle expérience en cours : Les chercheurs prennent un lysat cellulaire, contenant tout ce qu'il faut pour faire transcription/traduction. Ils y ajoutent un fragment d'ADN codant la luciférase + nts marqué au phosphore 32 (de manière à ce qu'il ne marque QUE l'ARN messager), et regardent la quantité d'ARN sur gel d'électrophorèse : -Cas n°1 contrôle : la taille et la quantité de l'ARNm reste constante au cours du temps -Cas n°2 ajout d'un ARN anti sens : légère diminution de la quantité, mais la taille reste constante au cours du temps -Cas n°2 ajout d'un ARN double brin : au bout de une heure, l'ARNm de "grande taille" disparaît et apparition d'ARN de plus petite taille aux alentours des 21-23nts Je voulais être sure que les ARN de petite tailles ne correspondaient bien PAS aux siRNA? (qui n'ont d'ailleurs pas encore été réellement découvert lors de cette expérience). Mais qui correspondent à un produit de dégradation de l'ARNm? Si mon raisonnement est bon et que ce ne sont pas les siRNA, cela voudrait dire que l'ARNm est dégradé, de la même taille que les siRNA (21-23nts)? Dites moi si je dis vraiment des bêtises et que je ne suis pas claire!.. Ce qui est complètement possible Merci d'avance bonne journée
LiseB Posted March 27, 2017 Posted March 27, 2017 Salut salut ! Désolée pour cette réponse un peu tardive... D'après ce que j'ai compris pour l'ajout d'un ARN double brin, l'apparition d'ARN de petite taille de 21-23 nucléotides correspond bien aux siRNA, M. Olichon l'a d'ailleurs noté sur son schéma que tu m'as envoyée. En effet les siRNA n'étaient pas encore connus et identifiés mais c'est bien leur apparition qui est vu sur l'électrophorèse. N'hésite pas si tu as d'autres questions, bonne soirée !
Fiona Posted March 28, 2017 Author Posted March 28, 2017 Salut, merci déjà! Mais du coup, y a un truc que je pas compris alors : -Les siRNA proviennent bien de la "découpe" d'un ARN double brin introduit (ou produit par la cellule mais ce n'est pas le cas ici)?? Si oui. Je ne comprends pas comment la fluorescence puisse se retrouver dans les siRNA, puisque la fluorescence a été introduit de manière à ce que ça marque seulement l'ARNm.. Parce qu'à l'oral il n'a pas dit clairement que c'était les siRNA, mais des produits de dégradation de l'ARNm.. Et c'est bien l’annotation sur la diapo qui est gênante.. Merci d'avance bonne journée
Solution LiseB Posted March 28, 2017 Solution Posted March 28, 2017 Re salut ! Les siRNA proviennent bien de la découpe d'un ARN double brin introduit. Ton raisonnement est bon ! Il faudrait lui demander si la technique de révélation avec l'électrophorèse montre uniquement les éléments fluorescents ou l'ensemble des ARN. Si cela montre uniquement les éléments fluorescents alors l'explication du prof est assez ambigüe ou si l'électrophorèse montre l'ensemble des ARN alors cela correspondrait. Si les ARN de petites tailles correspondraient aux produits dâdégradation de l'ARNm cela serait également bizarre que la dégradation fasse apparaître uniquement des fragments de même taille... Je te conseille de demander au prof directement pour être sure ! Dans tous les cas tu as bien compris le mécanisme de l'interférence et c'est le principal Bonne soirée !
Fiona Posted March 28, 2017 Author Posted March 28, 2017 Super merci tu me rassures! je vais aller au près du prof! Encore merci bonne soirée!
Recommended Posts