Oga Posted March 4, 2017 Posted March 4, 2017 Salut salut J'ai quelques petits problèmes sur ce QCM 15 du tat, je comprends pas la A et sa correction : j'étais ok sur le faot que ce soit faux mais je comprends pas la correction qui dit que les protéines retenues sont celles du 2nd pic? Pour moi les protéines des pics elles sont éluees a tel volume correspondant au pic. Et la E je vois pas comment faire la correction dit que cest pour 0.5M mais je comprends pas. Merci d'avance !
Solution Oberyn Posted March 4, 2017 Solution Posted March 4, 2017 Salut Pour l'item A, en fait on a fait une chromatographie échangeuse de cation, et non pas une gel-filtration. C'est un graph de chromato qu'on te présente. Du coup l'ordre de tes pics n'a rien à voir avec la masse de la protéine, mais avec sa charge! Vu que c'est une chromato échangeuse de cation elle va retenir toutes les protéines chargées positivement, hors ici la protéine 1 est exclue directement, elle est donc neutre ou chargée négativement, ce qui veut dire que le pHI de cette protéine est inférieur à 8. Pour la protéine du 2ème pic, c'est bien la protéine qui est retenue au départ (dont le pHi est supérieur à 8), mais si on voit un pic c'est parce qu'elle a été éluée grâce au NaCl. On travaille toujours à pHi = 8, donc normalement elle devrait pas sortir vu que toujours chargée +, hors, si elle sort, c'est parce qu'on a ajouté le NaCl, et les ions Na+ vont venir occuper les charges négatives de la colonne, tandis que les ions Cl- vont venir délogée la protéine qui était chargée positivement, du coup ça la décroche de la colonne et on voit le pic. En fait, l'élution de la deuxième protéine ne s'est pas faite via une augmentation de pH, mais par l'ajout de NaCl, d'ailleurs tu vois que ça correspond sur le graph, la protéine sort peu après l'ajout du NaCl ^^. Et pour l'item E, il faut que tu regarde où la droite en pointillé coupe le pic d'élution de la deuxième protéine, et tu vois que ça correspond à 0,5 environ
Oga Posted March 5, 2017 Author Posted March 5, 2017 Ahhh super merci beaucoup pour l'explication c'est clair maintenant Donc tampon ph 8 on part de 0 et on va jusqu'à 8?
Lediv Posted March 7, 2017 Posted March 7, 2017 Non le pH 8 est le pH de la solution dans laquelle tu as tes protéines,c'est ce qui détermine la charge de tes protéines. Et ensuite on élue en faisant varier les concentrations de NaCl, mais en aucun cas tu fais varier le pH
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