Technique du phage display

[Blop]

Bonjour!

Hier dans le cours de Segui je n'ai pas bien compris ce qu'était la technique du phage display, quelqu'un pour m'éclairer? Merci d'avance

[ClaraDelmas]

Bonjour! Cette partie n'a pas été traité l'an dernier donc n'hésite pas a poser des questions plus précises si c'est toujours pas clair!

 

Tout d'abord, un bactériophage (ou phage) est un virus n'infectant que des bactéries. Lors de cette infection, son ADN s'incorpore dans l'ADN de la bactérie hôte. La bactérie va ensuite se lyser et libérer un certains nombre de nouveaux phages qu'elle a produit, qui pourront infecter d'autre bactérie par simple contact. Les phages sont donc utilisés comme vecteurs de clonage pour insérer de l'ADN dans les bactéries.

 

La méthode du phage display est une méthode qui permet de relier les protéines aux gènes qui codent pour elles grâce à sa présentation sur la surface de phages. On lie le gène de la proteine d'intérêt au gène du phage codant pour une proteine exprimé au niveau de la capside (capsule du virus), L'hybride d'ADN constitué par le gène du phage et le gène d'intérêt est inséré dans Escherichia coli, de façon que le phage modifié soit produit par la bactérie. La bactérie va ensuite libérer ses phages produit qui expriment à leur surface notre proteine d'intérêt. On met ces phages produit en contact avec la 2e proteine d'intérêt présente à la surface d'un puit et on regarde si il y a interraction entre nos 2 proteines d'intérêt. Si c'est le cas, le phage restera accroché, si ca ne l'est pas (problème dans l'hybridome constitué, non intégration de l'ADN ....) , le phage ne sera pas accroché et éliminé par lavage. On procède ensuite à l'élution des phages fixés, que l'on récupère pour infecter d'autres bactéries et augmenter la quantité de ces phages bien conçus. À la fin, on procède au séquençage de l'ADN des phages produits par les bactéries, ce qui permet de caractériser les protéines interagissant.

[Blop]

D'accord merci beaucoup!