qcm 8 p56 concours 2013

[varanda31500]

Bonjour, je galere un peu avec ce qcm , quand il faut prendre en compte les site de restriction des amorce pour bien orienté le plasmide est ce que quelqu'un pourrait m'aider svp? Merci d'avance

[Guest Boris]

Bonjour,

 

En ce qui concerne le QCM 8 du concours 2013, on peut l'aborder de la manière suivante.

 

A. On constate que les extrémités de BamHI et de BclI sont compatibles (perso, si il y a 6 bases avec coupure au niveau de la première et que les 4 autres lettres sont identiques pour les deux extrémités, c'est qu'elles sont compatibles ... ça fait gagner du temps le jour du concours) Si elles sont compatibles et qu'elles sont dans une situation où elles ont leurs extrémités libres après coupure ... elles vont se lier ensemble pour reformer un plasmide circulaire car elles sont "compatibles". Pour éviter que le plasmide ne se referme avant d'avoir inséré notre ADN d'intérêt, on va déphosphoryler les extrémités pour éviter une fermeture irrémédiable. Item Vrai.

 

B. Si BamHI et BclI sont compatibles alors si on coupe le plasmide, on a 50% de chance que l'on ait un couple BamHI plasmide/BamHI fragment ; BclI plasmide/BclI fragment et 50% d'avoir un couple BamHIp/BclIf et inversement. Par conséquent, on a 1 chance sur deux d'avoir l'insertion du fragment dans le bon sens et donc 1 chance sur 2 pour que le fragment soit exprimé. Item Faux.

 

C. On a vu que l'on dispose d'une chance sur deux pour avoir la bonne insertion. Si l'orientation est bonne, on a deux sites BamHI accolés donc de nouveau coupable par une endonucléase, le fragment est libérable (idem pour l'autre côté). Cependant si le fragment est inséré à l'envers, le premier BamHI donne la base G et BclI donne GATCA. On obtient GGATCA. Or, cette combinaison n'est pas reconnaissable par une endonucléase. Le fragment ne peut pas être libéré dans ce cas. Item Faux.

 

D. On constate premièrement que BamHI et XbaI ne sont pas compatible et que le site XbaI est situé APRES BamHI. Item Vrai. Si il avait été avant, on aurait 100% de chance que le plasmide se place à l'envers. Item Vrai.

 

E. Les amorces a et b sont pour respectivement BamHI et BclI. Or HindIII est placé avant BamHI et XbaI est placé après BclI donc si on utilise ces sites, on ne coupera pas le fragment au milieu mais avant et après. On aura conservation du fragment. De plus, on ajoute dans l'énoncé qu'il n'y a pas de site de restriction pour ces enzymes et pour XbaI et HindIII à l'intérieur des produits de PCR. Item Vrai.

 

Voilà voilà ^^,

 

N'hésite pas si tu as d'autres questions ou si tu veux plus de détails,

 

Bonnes fêtes de fin d'année.

 

(si tu juges que la réponse te convient, je t'invite à marquer le post comme résolu ^^)

[varanda31500]

Merci beaucoup! C'est vraiment sympa d'avoir pris le temps de tout bien explique comme ca juste une petite precision sur ltem D apres promis jarrete de t'embeter:) je narrive pas a comprendre en quoi cela facilite le clonage dans la bonne orientation, parceque bamh1 et xba1 sont incompatible? S' il est ddans la mauvaise orientation ca se voit direct cest ca ? Mais du coup sur le plasmide du cote amorce b on coupe par bcl1 et sur le fragment par xba1 et les 2 sont pas compatible..dernier point a eclaircir^^

Et apres pour l'item b comme bamh1 et bcl1 sont vompatible le fragment devrait entre dans le plasmide dans nimporte quelle orientation non? Si j'ai bien compris on s' en fiche de ca il faut juste faire correspondre les cote 5' et 3' plasmide fragment ensemble pour qu'il y ai synthese ?