maguy Posted December 26, 2013 Posted December 26, 2013 Bonjour, Est-ce que quelqu'un pourrait m'expliquer le principe de la PCR avec 3 amorces (une qui est spécifique de la séquence mutée). Je comprends pas pk on fait cette manip et du coup je sais pas dans quelle sens doit être cette fameuse amorce ??? Merci
Guest melanie0607 Posted December 27, 2013 Posted December 27, 2013 Bonjour, Alors lorsqu'on fait une hybridation avec 3 amorces c'est qu'on veut détecter si il y a présence ou non d'une séquence mutée. Tu vas utiliser 2 amorces (n°1 et n°2) qui ne vont pas s'hybrider au niveau du site de mutation: il y aura donc hybridation que la séquence soit mutée ou non. Ensuite l'amorce n°3 va s'hybrider sur le site de mutation et va donc la révéler avec une des 2 autres amorces. Pour le sens, c'est le même principe qu'une PCR avec 2 amorces: il ne faut pas que tes 2 amorces "partent dans le même sens". Si ton amorce n°3 est orientée 3'- 5' elle ne va pas amplifier la séquence avec l'amorce n°1 orientée 3'-5' mais avec l'amorce n°2 orientée 5'-3'. C'est également en fonction de l'emplacement de la mutation par rapport aux amorces n°1 et n°2 que tu détermines le sens de l'amorce n°3. Voilà j'espère que ces explications vont t'aider! L'idéal aurait été de t'expliquer directement sur un schéma...
maguy Posted December 27, 2013 Author Posted December 27, 2013 Ok d'accord, y aurait juste un truc que je comprends pas. Quand tu dis " Ensuite l'amorce n°3 va s'hybrider sur le site de mutation et va donc la révéler avec une des 2 autres amorces ". ça veut dire qu'en présence de cette amorce 3, une des deux autres amorces sera capable de détecter une mutation, alors qu'à la base, elle se fixe sur une séquence non mutée ??
Solution Guest melanie0607 Posted December 27, 2013 Solution Posted December 27, 2013 Pour amplifier cette zone mutée tu as obligatoirement besoin de 2 amorces (situées sur les 2 brins et dans un sens opposé) pour qu'ensuite l'ADN polymérase puisse les allonger et créer un nouvel ADN double brin. Une seule amorce (la n°3) se fixe sur la mutation pas les 2. Mais c'est l'association de la n°3 et de la n°2 qui va te permettre de créer un nouveau fragment d'ADN. En répétant cette opération on va amplifier la séquence mutée et on pourra donc la détecter.
maguy Posted December 27, 2013 Author Posted December 27, 2013 D'aaaaccord ok merci beaucoup j'ai compris. Tu expliques super bien ! En tout cas merci de répondre aussi vite
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