Plasmide

[letartare06]

Salut je n'arrive pas à comprends comment on fait pour le QCM 2 de la session 2 de l'annales 2023-2024.

J'ai eu mauvais à la B et la D et à la C mais je ne comprends pas pq.

Je n'arrive pas à comprends comment on doit lire le tableau.

Merciii

[An-Schwann]

Je m’excuse pour la réponse tardive, j’avais complètement zappé le message,

Le tableau ici cest une électrophorèse, ca veux dire qu’on fait migré les plasmides selon la taille. Quand il y a un trait, ca veux dire qu’on a quelque chose (morceau de plasmide, plasmide entier) correspond à la taille marqué à gauche. 

Ensuite il faut comprendre ce qu’on fait, ici on prend l’ADNc codant la chaîne légère et on essaye de l’inséré dans le plasmide B. Cela n’a pas un taux de réussite de 100%, donc une fois qu’on a fait la manœuvre on insère les plasmides dans des clones bactériens pour qu’ils puissent amplifier les plasmides. Cela permet d’en avoir plein pour ensuite vérifier lequel sont bon. Une fois qu’on a fait ça, on a prélevé 3 plasmides, et on cherche à tester celui ou la manœuvre c’est bien réalise. Pour faire cela, on digère les 3 plasmide soit par Bgl1, soit par Hindlll, soit par Pts1 et Mlu1, et ont fait migré le résultats sur un gel d’éléctrophorèse. Cela nous permet de récupérer des résultats sur ca taille et donc de déduire lequel de ces 3 plasmides contient le construit qu’on veux.

L’item B pour moi cest un peu HP, car ca se basent sur des notions de génome et biocell du S1. En gros ici, on veut que la chaîne légère et la chaîne lourde soit transcrit dans un ARNm, si ce n’est pas le cas, le transcrit vas s’arrêter après la chaîne légère donc la chaîne lourde ne serait pas transcrite car il n’y a pas de promoteur devant. On en déduit que ce qu’il y a entre les deux ADNc, la séquence IRES permet d’éviter cela et donc d’exprimer ces deux protéines dans un seul ARNm. 

L’item C, il faut juste distinguer le plasmide recombinant et non recombinant. Un plasmide recombinant est un plasmide qui a intégré l’ADNc d’un autre plasmide. 

On voit que notre plasmide B fait 6800 pb, donc si on retrouve un plasmide dans le tableau qui fait 6800 pb, alors ce n’est pas un plasmide recombinant (car il na pas été modifié). Le plasmide 2, on a que des traits à 6800 pb, donc on en déduit qu’il n’est pas recombinant, donc l’item est faux.

L’item D est un peu plus dur. Ici on cherche à savoir si le plasmide 3 est le plasmide qui à intégré l’ADNc codant la chaîne légère dans le bon sens. Pour cela, je regarde la colonne PM car c’est quand on fait une digestion par Pst1 et Mlu1. Mlu1 est un site de restriction présent sur l’ADNc de la chaîne légère, et il n’est pas au milieu de celui ci, donc quand on digère par Mlu1 et Pst1, on peut déduire si l’ADNc à été inséré dans le bon sens. Si et seulement si il a été inséré dans le bon sens, alors on pourra obtenir la synthèse de la chaîne lourde et la chaîne légère. 

Sous PM, on voit un trait à environ 900-1000 et un à environ, 6500. 

Si on regarde à nos plasmide, on voit que pour la plasmide A, Mlu1 est proche du deuxième Hindlll, et pst1 est juste après Hindlll sur le plasmide B. On en déduit que si l’ADNc s’insère dans le bon sens, alors on obtiendra un tout petit fragment et un très grand fragment et si il s’insère dans le mauvais sens on aura un fragment un peu plus grand et un deuxième fragment encore très grands mais un peu plus petit. 

Si on observe notre tableau, on remarque que pour le plasmide 1, dans la colonne PM, on a un tout petit fragment, donc en déduit que la plasmide 1 est la plasmdie ayant inséré l’ADNc dans le bon sens. 

Le plasmdie 3 à une ligne un peux plus haute, donc on en déduit qu’il à inséré l’ADNc dans el mauvais sens, ce qui rend l’item faux. 

 

Est-ce que cest plus claire? 

[letartare06]

Salut merciii pour la réponse juste la C est vrai du coup je ne comprends pas pq. et pour la D je ne comprends pas trop. Pq on regarde PM je ne vois ce qui l'indique dans le QCM vu que y'a que Mlu1 dans le A et Pst1 dans le B on aurait pur prendre d'autre non.

Mercii

[An-Schwann]

59 minutes ago, letartare06 said:

réponse juste la C est vrai du coup je ne comprends pas pq

Dans la correction du TAT elle est bien marqué faux c'est bizzare car normalement l'item est bien faux 

1 hour ago, letartare06 said:

Pq on regarde PM je ne vois ce qui l'indique dans le QCM vu que y'a que Mlu1 dans le A et Pst1 dans le B on aurait pur prendre d'autre non.

Mercii

Justement c'est car on a Mlu1 dans le A qu'on le regarde. Enfaite on essaye de mettre la partie de A qui est entre Hindlll dans la B, qui nous donnera un plasmide finale que l'on va appeler plasmide C. Dans plasmide C on veut avoir l'ADNc du plasmide A, dans la bon sens. Donc on cherche parmis le plasmide 1, 2 et 3 lequel correspond a plasmide C. En fonction de la distance entre Mlu1 qui provient du plasmide A et Pst1 qui provient du plasmide B, on peut déduire le sens d'insertion de l'ADNc du plasmide A. 

C'est plus claire? As tu besoin que je fasse un schéma pour illustrer cela? 

[letartare06]

il y a 6 minutes, An-Schwann a dit :

Dans la correction du TAT elle est bien marqué faux c'est bizzare car normalement l'item est bien faux 

Oui dsl je me suis trompé d'exos en regardant. Je veux bien que tu m'expliques comment tu fais pour savoir si c'est dans le non sens stp merciii bcpp

[letartare06]

J'ai refait un exo de ce type le QCM3 mais je ne comprends pas pq j'ai eu faux à tout pratiquement.

https://ibb.co/4wg5qtkm

https://ibb.co/39mPLJ0n

Mercii