Jack11 Posted December 31, 2016 Posted December 31, 2016 Salut, quelqu'un pourrait-il me dire ce qu'on fait exactement dans cette technique car je ne pense pas avoir tout compris... Merci d'avance
Solution Gwendoline_sabat Posted January 8, 2017 Solution Posted January 8, 2017 En gros on réutilise le principe de la PCR pour introduire un fragment dans un vecteur.A. VRAI. Cela correspond a des étapes de PCR, il faut donc introduire les mêmes éléments que pour cette dernière (on utilisera juste une enzyme fidèle car ici l’intégrité du montage est importante).B. VRAI. Comme tu le voit sur le schéma la linéarisation du plasmide est nécessaire.C. FAUX. Ici la technique schématisée dans l'énoncé ne permet pas une amplification mais un clonage du fragment de PCR dans le plasmide.D. FAUX. Pourquoi pas ? Si elles sont présente dans le mélange de dNTPs rien ne l'empêche.E. VRAI. Oui, il manque bien une liaison phosphodiester due a la linéarisation du plasmide, pour pouvoir le linéarisé et évité son repliement on a utilisé la phosphatase alcaline ce qui empêche de reformer toutes les liaisons après insertion du fragment. C'est bien lors de la transformation de la bactérie par le plasmide que ces liaisons seront formées. Bonne chance pour le concours !
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